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猪PRV感染PK15差异表达miRNAs的功能探索及3个免疫相关基因的分子特征研究

中文摘要第1-10页
ABSTRACT第10-12页
缩略词表第12-14页
主要性状的中英文名称和缩写第14-15页
1 前言第15-38页
   ·研究问题的由来第15页
   ·猪抗病育种的研究进展第15-17页
   ·免疫与猪的抗病育种第17-20页
     ·免疫的概述第17-19页
     ·免疫与抗病力选择第19-20页
   ·干扰素及其诱导蛋白第20-24页
     ·干扰素的简介第20页
     ·干扰素的分类和诱生特性第20-21页
     ·干扰素的生物学作用第21-22页
     ·干扰素诱导蛋白第22-24页
   ·猪伪狂犬病毒的结构、特性及感染宿主的免疫反应第24-26页
     ·伪狂犬病毒的结构、增殖和特性第24-25页
     ·伪狂犬病毒感染宿主的免疫反应第25-26页
   ·MIRNA的发现、分子特征、生物发生过程及功能简介第26-30页
     ·miRNA的发现和命名方式第26-27页
     ·miRNA的分子特征第27页
     ·miRNA的生物发生过程第27-28页
     ·miRNA的基本功能第28-30页
     ·与免疫相关的miRNAs第30页
   ·免疫相关基因和MIRNAs分离方法第30-31页
   ·猪中免疫相关基因与MIRNAs研究进展与不足第31-32页
   ·3个免疫相关基因的研究进展第32-37页
     ·BCL10基因的研究进展第32-34页
     ·防御素基因的研究进展第34-35页
     ·STAT6基因的研究进展第35-37页
   ·本研究的目的与意义第37-38页
2 材料和方法第38-59页
   ·材料第38-45页
     ·试验样品第38-39页
     ·microRNA芯片第39页
     ·载体和菌株第39-41页
     ·主要试剂和试剂盒第41-43页
     ·主要仪器设备第43页
     ·主要分子生物学软件、数据库和网站第43-45页
   ·研究方法第45-59页
     ·本研究的技术路线第45页
     ·细胞培养第45-46页
     ·病毒感染第46页
     ·RNA提取与芯片杂交设计第46页
     ·microRNA芯片图像的采集与数据处理第46-47页
     ·miRNA的分离和克隆第47-51页
     ·基因的定量表达分析第51页
     ·microRNA靶基因的预测和验证第51-53页
     ·猪伪狂犬病毒绝对定量PCR检测方法第53-54页
     ·猪伪狂犬病毒免疫荧光染色第54页
     ·猪免疫相关基因的分离和克隆第54-55页
     ·猪免疫相关基因的SCHP和RH法染色体定位第55-56页
     ·猪免疫相关基因亚细胞定位研究第56页
     ·猪免疫相关基因组织表达谱分析第56-57页
     ·猪免疫相关基因的多态性检测与关联分析第57-59页
3 结果第59-85页
   ·猪伪狂犬病毒感染PK15细胞差异表达MICRORNA筛选第59-61页
     ·感染前后差异表达microRNA筛选结果第59页
     ·real-time PCR验证差异表达microRNA结果第59-60页
     ·芯片数据聚类结果第60-61页
   ·MIR-21超表达载体构建及MINICS合成第61-62页
   ·MIR-21靶基因预测与验证结果第62-66页
     ·miR-21靶基因预测结果第62页
     ·双荧光素酶报告基因结果第62-63页
     ·ELISA验证结果第63-66页
   ·MIR-21与IP10在POLYI:C刺激后表达变化第66-67页
   ·靶基因IP10在猪各组织的表达情况第67-68页
     ·猪组织总RNA的提取和检测结果第67页
     ·IP10的组织表达谱第67-68页
   ·靶基因IP10 3'UTR SNP检测和性状关联分析第68-71页
     ·靶基因IP10-3'UTR SNP检测第68页
     ·靶基因3'UTR SNP与免疫性状的关联分析结果第68-71页
   ·超表达MIR-21对猪伪狂犬病毒在细胞中增殖的影响第71-73页
     ·绝对定量PCR检测伪狂犬病毒增殖的结果第71-72页
     ·免疫荧光染色法检测伪狂犬病毒增殖的结果第72-73页
   ·猪3个免疫相关基因分子特征的研究第73-85页
     ·猪BCL10基因分子特征的研究第73-78页
     ·猪PBD-108基因分子特征的研究第78-80页
     ·猪STAT6基因分子特征的研究第80-85页
4 讨论第85-94页
   ·关于筛选差异表达MIRNAs的方法第85-86页
   ·关于MIR-21对靶基因的调控作用第86-87页
     ·miRNAs的靶基因预测第86-87页
     ·miR-21对靶基因IP10的调控第87页
   ·IP10基因与免疫性状存在一定程度的关联第87-89页
     ·IP10基因的组织表达特点第87-88页
     ·IP10基因3'UTR的SNP与免疫性状的关联第88-89页
   ·关于MIR-21调节伪狂犬病毒的复制第89-90页
   ·关于猪BCL10基因的定位、表达和性状关联第90-91页
   ·关于猪PBD-108基因的SNP检测和红细胞性状的关联第91-92页
   ·关于猪STAT6基因的定位、表达和SNP多态性检测第92-94页
5 小结第94-96页
   ·主要结果与结论第94-95页
   ·本研究的创新点与特色第95页
   ·值得进一步研究的问题第95-96页
参考文献第96-110页
在读期间发表的论文第110-111页
致谢第111页

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