| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-25页 |
| 1 抗真菌药物及真菌药物耐受性概述 | 第10-13页 |
| ·真菌病现状概述 | 第10页 |
| ·抗真菌药物研究概述 | 第10-12页 |
| ·以细胞壁组分D-β-1,3-葡聚糖的生物合成作为设计靶点 | 第11页 |
| ·以细胞壁组分几丁质的生物合成作为设计靶点 | 第11页 |
| ·以细胞膜组分麦角固醇作为设计靶点 | 第11页 |
| ·以细胞膜组分麦角固醇合成途径作为设计靶点 | 第11页 |
| ·以致病菌DNA、RNA的合成作为设计靶点 | 第11-12页 |
| ·有潜力成为抗真菌药物的研究 | 第12页 |
| ·真菌耐药性研究概述 | 第12-13页 |
| 2 钙信号通路 | 第13-20页 |
| ·钙离子 | 第14-15页 |
| ·钙离子通道蛋白MidA和CchA | 第15-16页 |
| ·钙离子结合蛋白CAM | 第16-17页 |
| ·CaM激酶CnaA | 第17-19页 |
| ·CnaA调控的转录因子CrzA | 第19-20页 |
| 3 模式生物构巢曲霉ASPERGILLUS NIDULANS | 第20-23页 |
| 4 本课题的研究内容、思路及方法 | 第23-25页 |
| ·研究内容 | 第23页 |
| ·研究思路与研究方法 | 第23-25页 |
| 第二章 参与调控真菌多药抗性(PLEIOTROPIC DRUG RESISTANCE,P D R)的分子结构的信息学及系统学分析 | 第25-31页 |
| 1 方法 | 第25-26页 |
| ·构建多物种N-J树 | 第25-26页 |
| ·统计每两种物种PDR的同源性 | 第26页 |
| ·分析各物种PDR蛋白的结构 | 第26页 |
| 2 结果 | 第26-29页 |
| ·进化分析各物种中PDR蛋白亲缘关系 | 第26-28页 |
| ·PDR蛋白结构分析 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| ·真菌的多药抗性 | 第29页 |
| ·真菌中ABC超家族的系统进化关系 | 第29-30页 |
| 4 结语 | 第30-31页 |
| 第三章 构巢曲霉钙信号系统主要元件参与药物应答的研究 | 第31-46页 |
| 1 材料与方法 | 第31-36页 |
| ·菌种及培养条件 | 第31-32页 |
| ·主要试剂及来源 | 第32页 |
| ·所用药物 | 第32-33页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-36页 |
| ·固体琼脂稀释法测定菌株对于药物的敏感性 | 第33-34页 |
| ·肉汤稀释法测试菌株对于药物的敏感性 | 第34页 |
| ·E-test实验测试菌株对于药物的敏感性 | 第34页 |
| ·丝状真菌体外MIC测试(参考CLSI-M38-A2) | 第34-35页 |
| ·A.nidulans基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·alcA(p)：：GFP-pmrA同源整合菌株的构建 | 第35页 |
| ·原生质体的制备与转化 | 第35-36页 |
| ·重组子(发生Gene Replacement的转化子)的初步筛选 | 第36页 |
| ·重组子的进一步PCR鉴定 | 第36页 |
| 2 实验结果 | 第36-44页 |
| ·胞外钙离子影响构巢曲霉野生型菌株对唑类药物的敏感性 | 第36-40页 |
| ·固体培养条件下野生型菌株在胞外钙离子浓度变化后对唑类药物的敏感性 | 第36-38页 |
| ·液体培养条件下野生型菌株在胞外钙离子浓度变化后对唑类药物的敏感性 | 第38-39页 |
| ·E-test实验测定菌株对唑类药物的敏感性 | 第39页 |
| ·体外MIC实验测定菌株对唑类药物的敏感性 | 第39-40页 |
| ·钙信号系统重要蛋白调控构巢曲霉对唑类药物的敏感性 | 第40-44页 |
| ·钙信号系统核心蛋白突变株对唑类药物的敏感性 | 第40-41页 |
| ·钙信号系统中钙通道蛋白缺失菌株对唑类药物的敏感性 | 第41-42页 |
| ·钙信号系统下游靶蛋白突变株对唑类药物的敏感性 | 第42-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 钙信号系统调节构巢曲霉对唑类药物敏感性的机制研究 | 第46-58页 |
| 1 材料与方法 | 第47-51页 |
| ·菌种及培养条件 | 第47页 |
| ·试剂与仪器 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-51页 |
| ·菌液制备与染料负载 | 第48页 |
| ·流式细胞仪测定胞内Rhodamine 123的积累量 | 第48页 |
| ·胞内钙离子浓度测定菌液制备与染料负载 | 第48页 |
| ·激光共聚焦测定细胞内钙离子浓度变化 | 第48页 |
| ·菌丝体麦角固醇的抽提 | 第48-49页 |
| ·实时荧光定量PCR测定构巢曲霉野生型在唑类药物刺激时钙信号系统主要蛋白及药物外排泵基因的表达量 | 第49-51页 |
| 2 结果 | 第51-56页 |
| ·加入EGTA后,胞内Rhodamine 123的积累量 | 第51-52页 |
| ·EGTA的加入会引起胞内钙离子浓度的降低 | 第52-53页 |
| ·钙信号系统主要蛋白缺失菌株胞内Rhodamine 123的积累量 | 第53-54页 |
| ·韩信号系统主要蛋白在吨类药物刺激下基因表达量的变化 | 第54-55页 |
| ·钙信号系统主要蛋白缺失菌株细胞膜组分麦角固醇含量测定 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 钙信号系统调节烟曲霉对唑类药物的敏感性且EGTA和唑类药物联用模式在活体中可以发挥作用 | 第58-63页 |
| 1 材料与方法 | 第58-59页 |
| ·菌种及培养条件 | 第58页 |
| ·主要试剂及来源 | 第58-59页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第59页 |
| ·方法 | 第59页 |
| ·固体平板稀释法测试烟曲霉对唑类药物的敏感性 | 第59页 |
| ·E-test实验测试烟曲霉对于药物的敏感性 | 第59页 |
| ·大蜡螟(Galleria mellonella)侵染实验 | 第59页 |
| 2 结果 | 第59-62页 |
| ·在固体培养条件下测定烟曲霉对唑类药物的敏感性 | 第59-60页 |
| ·E-test实验测定菌株对唑类药物的敏感性 | 第60-61页 |
| ·大蜡螟(Galleria mellonella)侵染实验 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-63页 |
| 第六章 结论 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
