| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| ·轮虫一潜在的衰老研究模式动物 | 第15-16页 |
| ·轮虫衰老研究的生物学基础 | 第16-21页 |
| ·轮虫衰老研究的生态学基础 | 第16-18页 |
| ·轮虫衰老研究的分子生物学基础 | 第18-21页 |
| ·白藜芦醇的抗衰老研究 | 第21-23页 |
| ·白藜芦醇对寿命的影响 | 第21-22页 |
| ·白藜芦醇的其他作用 | 第22-23页 |
| ·饮食限制的抗衰老研究 | 第23-24页 |
| ·饮食限制对寿命的影响 | 第23-24页 |
| ·饮食限制对生殖的影响 | 第24页 |
| ·本文研究目的与意义 | 第24-26页 |
| ·研究目的 | 第24页 |
| ·研究意义 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 轮虫抗氧化酶和应激蛋白基因的克隆和功能分析 | 第26-82页 |
| 1. 基因的克隆方法 | 第27-33页 |
| ·轮虫的培养和总RNA的提取 | 第27页 |
| ·RNA质量测定 | 第27-28页 |
| ·RNA逆转录 | 第28页 |
| ·目的基因兼并引物设计 | 第28-29页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第29页 |
| ·目的基因PCR产物割胶回收 | 第29页 |
| ·连接PMD~(TM)-19T载体 | 第29-30页 |
| ·菌液PCR验证 | 第30页 |
| ·测序比对 | 第30页 |
| ·cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增基因全长 | 第30-32页 |
| ·目的基因生物信息学分析 | 第32页 |
| ·构建系统进化树 | 第32页 |
| ·荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 2. BCMNSOD基因的克隆和结构功能分析 | 第33-40页 |
| ·BcMnSOD引物设计 | 第33-34页 |
| ·BcMnSOD核苷酸序列分析 | 第34-35页 |
| ·MnSOD多重序列比对 | 第35-36页 |
| ·MnSOD系统进化树 | 第36-38页 |
| ·MnSOD三级结构预测 | 第38-39页 |
| ·温度对BcMnSOD mRNA表达的影响 | 第39-40页 |
| 3. BcCuZNSOD基因的克隆和结构功能分析 | 第40-48页 |
| ·BcCuZnSOD引物设计 | 第40-41页 |
| ·BcCuZnSOD核苷酸序列分析 | 第41-43页 |
| ·CuZnSOD多重序列比对 | 第43-44页 |
| ·CuZnSOD系统进化树 | 第44-46页 |
| ·CuZnSOD三级结构预测 | 第46页 |
| ·温度对BcCuZnSOD mRNA的影响 | 第46-48页 |
| 4. BcCAT基因的克隆和结构功能分析 | 第48-54页 |
| ·BcCAT引物设计 | 第48-49页 |
| ·BcCAT核苷酸序列分析 | 第49-51页 |
| ·CAT多重序列比对 | 第51-52页 |
| ·CAT三级结构预测 | 第52-53页 |
| ·温度对BcCAT mRNA的影响 | 第53-54页 |
| 5. BCHSP基因家族的克隆和结构功能分析 | 第54-75页 |
| ·Bchsp40克隆和结构功能分析 | 第54-58页 |
| ·Bchsp40引物设计 | 第54-55页 |
| ·Bchsp40核苷酸序列分析 | 第55-57页 |
| ·HSP40多重序列比对 | 第57-58页 |
| ·Bchsp60克隆和结构功能分析 | 第58-62页 |
| ·Bchsp60引物设计 | 第58-59页 |
| ·BcHSP60核苷酸序列分析 | 第59-60页 |
| ·BcHSP60多重序列比对 | 第60-62页 |
| ·Bchsp70克隆和结构功能分析 | 第62-66页 |
| ·Bchsp70引物设计 | 第62-63页 |
| ·Bchsp70核苷酸序列分析 | 第63-65页 |
| ·HSP70多重序列比对 | 第65-66页 |
| ·Bchsp90克隆和结构功能分析 | 第66-71页 |
| ·Bchsp90引物设计 | 第66-67页 |
| ·Bchsp90核苷酸序列分析 | 第67-69页 |
| ·HSP90多重序列比对 | 第69-71页 |
| ·BcHSP40,BcHSP60,BcHSP70,BcHSP90蛋白三级结构预测 | 第71-72页 |
| ·HSPs家族系统进化树 | 第72-74页 |
| ·温度对Bchsp40,Bchsp60,Bchsp70和Bchsp90 mRNA表达影响 | 第74-75页 |
| 6. 讨论 | 第75-82页 |
| ·BcMnSOD结构及表达分析 | 第77-78页 |
| ·BcCuZnSOD结构及表达分析 | 第78-79页 |
| ·BcCAT结构及表达分析 | 第79-80页 |
| ·Bchsps结构及表达分析 | 第80-82页 |
| 第三章 萼花臂尾轮虫衰老特征描述 | 第82-91页 |
| 1. 材料与方法 | 第82-84页 |
| ·轮虫的培养 | 第82页 |
| ·藻类的培养与计数 | 第82-83页 |
| ·实验设计 | 第83-84页 |
| 2. 结果分析 | 第84-88页 |
| ·单个体存活曲线 | 第84页 |
| ·不同年龄萼花臂尾轮虫外形变化 | 第84-85页 |
| ·不同年龄阶段萼花臂尾轮虫游泳速度变化 | 第85-86页 |
| ·轮虫衰老过程中MnSOD,CuZnSOD和CAT基因表达的变化 | 第86-87页 |
| ·萼花臂尾轮虫衰老过程中hsps基因表达的变化 | 第87-88页 |
| 3. 讨论 | 第88-91页 |
| 第四章 白藜芦醇和饮食限制对轮虫衰老和生殖的影响 | 第91-108页 |
| 1. 白藜芦醇对轮虫寿命和生殖的影响 | 第91-97页 |
| ·材料与方法 | 第91-92页 |
| ·实验设计 | 第92-93页 |
| ·结果与分析 | 第93-97页 |
| ·白藜芦醇对轮虫寿命的影响 | 第93-94页 |
| ·低浓度白藜芦醇(1-20μM)对轮虫生殖的影响 | 第94页 |
| ·高浓度白藜芦醇(50μM)对轮虫生殖的影响 | 第94-96页 |
| ·50μM白藜芦醇对轮虫休眠卵和无性卵孵化的影响 | 第96-97页 |
| 2. 饮食限制对轮虫寿命和生殖的影响 | 第97-100页 |
| ·材料与方法 | 第97页 |
| ·实验设计 | 第97页 |
| ·结果与分析 | 第97-100页 |
| ·饮食限制对轮虫寿命的影响 | 第97页 |
| ·饮食限制对轮虫繁殖的影响 | 第97-100页 |
| 3. 饮食限制和白藜芦醇对轮虫游动速度的影响 | 第100-102页 |
| ·材料与方法 | 第100页 |
| ·实验设计 | 第100页 |
| ·结果与分析 | 第100-102页 |
| 4. 饮食限制和白藜芦醇预处理对轮虫抗氧化性影响 | 第102-105页 |
| ·材料与方法 | 第102页 |
| ·实验设计 | 第102页 |
| ·结果分析 | 第102-105页 |
| 5. 讨论 | 第105-108页 |
| ·白藜芦醇和饮食限制对轮虫寿命的影响 | 第105-106页 |
| ·白藜芦醇和饮食限制对轮虫生殖的影响 | 第106-108页 |
| 第五章 白藜芦醇和饮食限制对基因表达的影响 | 第108-114页 |
| 1. 材料和方法 | 第108页 |
| 2. 实验设计 | 第108-109页 |
| 3. 结果和分析 | 第109-112页 |
| ·白藜芦醇对BcMnSOD,BcCuZnSOD和BcCAT表达的影响 | 第109-110页 |
| ·饮食限制对BcMnSOD,BcCuZnSOD和BcCAT表达的影响 | 第110页 |
| ·饮食限制对轮虫Bchsps表达的影响 | 第110-112页 |
| 4. 讨论 | 第112-114页 |
| 第六章 维生素E和H_2O_2对轮虫基因表达的影响 | 第114-123页 |
| 1. 材料和方法 | 第114页 |
| 2. 实验设计 | 第114页 |
| 3. 结果和分析 | 第114-120页 |
| ·维生素E对萼花臂尾轮虫寿命和生殖的影响 | 第114-115页 |
| ·维生素E对BcMnSOD,BcCuZnSOD和BcCAT表达的影响 | 第115页 |
| ·维生素E对Bchsp40,Bchsp60,Bchsp70和Bchsp90表达的影响 | 第115-117页 |
| ·H_2O_2对BcMnSOD,BcCuZnSOD和BcCAT表达的影响 | 第117-119页 |
| ·H_2O_2对Bchsp40,Bchsp60,Bchsp70和Bchsp90表达的影响 | 第119-120页 |
| 4. 讨论 | 第120-123页 |
| 小结与展望 | 第123-126页 |
| 参考文献 | 第126-144页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第144-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 附录1 文中涉及的物种名称 | 第146-148页 |
| 附录2 文中所用的缩写语 | 第148-149页 |
