| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第8-25页 |
| 第一章 镉诱导细胞自噬的研究进展 | 第9-15页 |
| ·镉(Cadmium,Cd)概述 | 第9页 |
| ·自噬(Autophagy)概述 | 第9-11页 |
| ·镉诱导细胞自噬现状 | 第11-12页 |
| ·镉诱导细胞凋亡现状 | 第12-13页 |
| 参考文献 | 第13-15页 |
| 第二章 镉诱导细胞自噬相关通路研究进展 | 第15-20页 |
| ·镉诱导自噬信号通路的研究现状 | 第15页 |
| ·Ras/Raf/MEK/ERK1/2信号通路在自噬调控中的作用 | 第15-16页 |
| ·Class Ⅰ PI3K-Akt-mTOR信号通路在自噬调控中的作用 | 第16-18页 |
| 参考文献 | 第18-20页 |
| 第三章 细胞自噬多重功能研究进展 | 第20-25页 |
| ·自噬促进细胞生存、维持自我稳态 | 第20页 |
| ·自噬促进细胞死亡 | 第20页 |
| ·自噬诱导细胞发生恶性转化 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-25页 |
| 第二部分 实验研究 | 第25-57页 |
| 第四章 pcDNA3.1-GFP-LC3B真核表达载体的构建 | 第26-36页 |
| 摘要 | 第26页 |
| Abstract | 第26-27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-32页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-32页 |
| ·LC3B基因模板的获得 | 第27-28页 |
| ·LC3B基因引物设计 | 第28页 |
| ·LC3B基因的扩增和获得 | 第28页 |
| ·LC3B基因PCR产物纯化 | 第28-29页 |
| ·基因与T载体连接并测序 | 第29页 |
| ·质粒pcDNA3.1-GFP的提取 | 第29-30页 |
| ·目的基因与载体双酶切 | 第30页 |
| ·目的基因与载体连接 | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-34页 |
| ·目的基因扩增结果 | 第32页 |
| ·菌落扩增结果 | 第32-33页 |
| ·双酶切鉴定结果 | 第33页 |
| ·pcDNA3.1-GFP-LC3B载体测序结果 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-36页 |
| 第五章 镉诱导人肝肾细胞自噬的研究 | 第36-46页 |
| 摘要 | 第36-37页 |
| Abstract | 第37-38页 |
| 1 材料与方法 | 第38-40页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·细胞的培养 | 第38页 |
| ·细胞活性形态学观察 | 第38-39页 |
| ·重组质粒转染细胞检测自噬 | 第39页 |
| ·透射电子显微镜(TEM)检测自噬 | 第39页 |
| ·免疫印记(Western blot)分析 | 第39-40页 |
| ·数据处理 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-43页 |
| ·低浓度镉(<10μM)处理HEK293细胞后形态学观察 | 第40-41页 |
| ·GFP-LC3B质粒转染至HEK293细胞 | 第41页 |
| ·荧光显微镜检测镉诱导的自噬 | 第41-42页 |
| ·透射电子显微镜观察镉诱导HEK293和WRL68细胞自噬体的发生 | 第42-43页 |
| ·Western blot检测镉诱导HEK293细胞自噬相关蛋白表达 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-46页 |
| 第六章 镉诱导HEK293细胞自噬与凋亡及ERK1/2和AKT在自噬中作用的研究 | 第46-57页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| Abstract | 第47-48页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·细胞的培养 | 第48-49页 |
| ·免疫印记(Western blot)分析 | 第49页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第49页 |
| ·长期低浓度镉处理对HEK293细胞活性影响 | 第49-50页 |
| ·数据处理 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·Western blot检测镉诱导HEK293细胞自噬相关蛋白表达 | 第50-51页 |
| ·流式细胞仪检测镉诱导HEK293细胞的凋亡 | 第51-52页 |
| ·Western blot检测3-MA对镉诱导的HEK293细胞凋亡的影响 | 第52-53页 |
| ·极低浓度镉(<2μM)处理HEK293细胞40d后形态变化 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 全文总结 | 第57-58页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
