| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-20页 |
| ·磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)的研究进展 | 第11-13页 |
| ·HumanPRPS1突变造成的人类遗传疾病 | 第11-12页 |
| ·酿酒酵母中PRS家族蛋白以形成复合体的发挥作用 | 第12-13页 |
| ·PRS家族蛋白在细菌中的研究 | 第13页 |
| ·在构巢曲霉中研究胞质分裂的意义及研究现状 | 第13-15页 |
| ·构巢曲霉中PRS蛋白参与调节胞质分裂 | 第15-18页 |
| ·构巢曲霉中SIN途径反向调节子的筛选 | 第15-17页 |
| ·PRS家族蛋白作为SEPH的反向调节子调节胞质分裂 | 第17-18页 |
| ·本课题的研究内容、思路和方法 | 第18-20页 |
| ·研究内容 | 第18页 |
| ·研究思路 | 第18页 |
| ·研究方法 | 第18-20页 |
| 第2章 构巢曲霉ANPRS蛋白家族的信息学分析和基因敲除实验以及初步的表型研究 | 第20-31页 |
| ·材料与方法 | 第23-28页 |
| ·菌种、质粒及培养条件 | 第23页 |
| ·试剂与仪器 | 第23页 |
| ·引物设计 | 第23-26页 |
| ·融合PCR | 第26-27页 |
| ·扩增全长的各组成片段 | 第26页 |
| ·三片段连接FusionPCR,产物纯化和质量评估 | 第26-27页 |
| ·构巢曲霉原生质体的制备及转化 | 第27页 |
| ·重组子的初步筛选 | 第27页 |
| ·转化子的进一步PCR诊断 | 第27-28页 |
| ·实验结果 | 第28-29页 |
| ·转化子的初步表型鉴定 | 第28页 |
| ·转化子的诊断PCR结果 | 第28-29页 |
| ·Anprs1,2,3敲除菌株的细胞学表型 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第3章 构巢曲霉ANPRS蛋白家族条件菌株的构建、筛选及鉴定 | 第31-41页 |
| ·材料与方法 | 第32-37页 |
| ·菌种及培养条件 | 第32页 |
| ·试剂与仪器 | 第32页 |
| ·A.nidulans基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·alcA(p)：：GFP-Anprs1,2,3同源整合菌株的构建 | 第33-34页 |
| ·重组子(发生GeneReplacement的转化子)的初步筛选 | 第34-35页 |
| ·条件菌株的Western验证 | 第35-36页 |
| ·构巢曲霉蛋白样品的制备 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第35-36页 |
| ·样品的印记(转膜) | 第36页 |
| ·免疫检测 | 第36页 |
| ·alc：：GFP：：AnPRS1,2,3在酒精启动子调控下的动态定位 | 第36-37页 |
| ·实验结果 | 第37-40页 |
| ·重组子的初步表型鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组子的进一步PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·条件菌株的western验证 | 第39页 |
| ·AnPRS1,2,3三个蛋白的细胞学定位 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第4章 构巢曲霉ANPRS蛋白家族的细胞学功能研究 | 第41-49页 |
| ·材料与方法 | 第41-43页 |
| ·菌种及培养条件 | 第41-42页 |
| ·试剂与仪器 | 第42页 |
| ·显微观察 | 第42页 |
| ·孢子计数 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-47页 |
| ·AnPRS2与AnPRS3对孢子的萌发都是必需的 | 第43-44页 |
| ·AnPRS2在菌丝生长中也是必需的,AnPRS3却不是 | 第44-45页 |
| ·高表达AnPRS2抑制胞质分裂及无性产孢 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·AnPRS2在构巢曲霉的整个生长阶段都是必需的,AnPRS3只是在孢子萌发阶段是必需的 | 第47页 |
| ·AnPRS家族对胞质分裂过程的抑制作用 | 第47-49页 |
| 第5章 构巢曲霉ANPRS蛋白家族的转录水平和酶活特性以及蛋白相互作用的分析 | 第49-58页 |
| ·材料与方法 | 第49-53页 |
| ·菌种及培养条件 | 第49页 |
| ·试剂与仪器 | 第49-50页 |
| ·实时荧光定量PCR测定Anprs1,2,3在构巢曲霉发育各阶段表达量的差别 | 第50-52页 |
| ·构巢曲霉总RNA的提取 | 第50页 |
| ·反转录PCR | 第50-51页 |
| ·Real-time qPCR | 第51-52页 |
| ·数据处理 | 第52页 |
| ·PRS酶活力的测定 | 第52-53页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-57页 |
| ·Anprs1,2,3的转录水平在菌丝发育的不同阶段各不相同 | 第53-54页 |
| ·AnPRS1,2,3三个蛋白对PRS的酶活贡献各不相同 | 第54-55页 |
| ·酵母双杂交实验证实构巢曲霉中AnPRS1,2,3相互之间存在物理相互作用 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第6章 结论 | 第58-60页 |
| ·PRS蛋白家族在构巢曲霉中所发挥的生物学功能 | 第58页 |
| ·ANPRS2在调节构巢曲霉PRPP合成酶活性中扮演核心角色 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 附录A 硕士期间获奖情况 | 第63页 |
| 附录B 硕士期间参与课题 | 第63页 |
| 附录C 硕士期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
