| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| ·研究目的和意义 | 第12页 |
| ·口蹄疫的流行性研究及防控经验 | 第12-13页 |
| ·口蹄疫的流行概况 | 第12-13页 |
| ·口蹄疫的防控经验 | 第13页 |
| ·口蹄疫病毒研究进展 | 第13-16页 |
| ·口蹄疫的病原学研究 | 第13-14页 |
| ·口蹄疫病毒持续感染研究 | 第14-15页 |
| ·口蹄疫的受体研究 | 第15页 |
| ·口蹄疫病毒的遗传变异 | 第15-16页 |
| ·抗口蹄疫病毒研究 | 第16-18页 |
| ·抗口蹄疫疫苗研究 | 第16-17页 |
| ·抗口蹄疫 RNA 干扰研究 | 第17-18页 |
| ·同源打靶技术研究进展 | 第18-20页 |
| ·核酸进入细胞核的递呈系统 | 第20-22页 |
| ·核显微注射技术 | 第20页 |
| ·病毒载体递呈技术 | 第20-21页 |
| ·精子介导的基因转移 | 第21页 |
| ·同源重组介导的基因插入 | 第21页 |
| ·微染色体转移技术 | 第21-22页 |
| 第二章 基于猪基因组位点特异性重组的 RNA 干扰载体的构建 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·菌株、组织、及质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·引物以及多克隆酶切位点的设计 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·感受态细胞制备 | 第24页 |
| ·感受态细胞转化 | 第24页 |
| ·NanoDrop 2000 测定 DNA/RNA 浓度 | 第24页 |
| ·同源重组臂、pCMV、hU6 表达元件的设计 | 第24-25页 |
| ·同源臂的克隆与鉴定 | 第25页 |
| ·pCMV 表达元件的扩增以及鉴定 | 第25-26页 |
| ·hU6 表达元件的构建以及鉴定 | 第26页 |
| ·骨架载体多克隆酶切位点的设计 | 第26页 |
| ·具有同源重组特性的 RNA 干扰载体的亚克隆组装 | 第26-27页 |
| ·基因图谱的绘制以及功能分析 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-30页 |
| ·多克隆酶切位点序列 | 第27页 |
| ·同源臂的扩增以及序列分析 | 第27-28页 |
| ·NEO 表达元件的扩增以及序列分析 | 第28页 |
| ·hU6 表达元件的扩增以及序列分析 | 第28-29页 |
| ·亚克隆产生最终载体以及载体作图 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 抗口蹄疫 PK-15 细胞模型的建立 | 第31-38页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·细胞 | 第31页 |
| ·实验试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32-35页 |
| ·细胞培养方法 | 第32页 |
| ·细胞计数 | 第32页 |
| ·细胞抗 G418 抗性浓度筛选 | 第32页 |
| ·电击条件筛选 | 第32-33页 |
| ·质粒的线性化以及纯化 | 第33页 |
| ·电击转染细胞 | 第33-34页 |
| ·抗 G418 细胞克隆的筛选（实验组） | 第34页 |
| ·阳性克隆细胞的筛选（实验组） | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-36页 |
| ·质粒线性化 | 第35页 |
| ·G418 最低致死浓度 | 第35页 |
| ·电击转染条件优化 | 第35页 |
| ·电击转化 | 第35页 |
| ·抗 G418 细胞抗性筛选 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 阳性克隆细胞株基因表达检测以及抗口蹄疫病毒抗性检测 | 第38-44页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·细胞以及毒株 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·荧光定量引物设计 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·相对荧光定量确定基因 mRNA 相对表达水平 | 第39-40页 |
| ·间接 ElISA 测定细胞表面αv 亚基的蛋白表达水平 | 第40页 |
| ·攻毒保护实验 | 第40页 |
| ·病毒 TCID50测定 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-43页 |
| ·β3 的 mRNA 表达水平 | 第41页 |
| ·αv 的 mRNA 表达水平 | 第41-42页 |
| ·αv 的蛋白表达水平 | 第42页 |
| ·攻毒保护实验 | 第42页 |
| ·FMDV 对阳性克隆细胞 TCID50的测定 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 全文结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-66页 |
| 附录 1：溶液配制 | 第51-53页 |
| 附录 2：试剂盒说明书 | 第53-58页 |
| 附录 3：核苷酸序列 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
