| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·干扰素的抗病毒机制 | 第13-15页 |
| ·E3 蛋白介导的痘苗病毒抗干扰素作用机制 | 第15-20页 |
| ·通过抑制 PKR 活化 | 第15-17页 |
| ·通过阻断 dsRNA 抑制 2′,5′-OAS/RNaseL 系统的活化 | 第17-18页 |
| ·通过抑制 RNA 聚合酶Ⅲ介导的 dsRNA 传导通路 | 第18页 |
| ·通过与 ISG15 结合并抑制其修饰活性 | 第18-19页 |
| ·抑制 ADAR1 催化腺苷酸转化为次黄嘌呤的编辑活性 | 第19页 |
| ·抑制 IRF3/7 的的活化 | 第19-20页 |
| ·研究展望 | 第20-21页 |
| 第二章 绵羊痘病毒实时荧光定量 PCR 检测方法的建立 | 第21-28页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·毒株 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-23页 |
| ·探针和引物的设计 | 第21页 |
| ·质粒标准品的构建 | 第21-22页 |
| ·外围引物的设计 | 第21-22页 |
| ·外围片段的 PCR 扩增 | 第22页 |
| ·外围片段的克隆 | 第22页 |
| ·SPPV qPCR 检测方法反应体系的建立 | 第22页 |
| ·qPCR 敏感性检验 | 第22页 |
| ·qPCR 重复性检验 | 第22页 |
| ·qPCR 特异性检验 | 第22-23页 |
| ·试验结果 | 第23-26页 |
| ·外围片段的 PCR 扩增 | 第23页 |
| ·外围片段的克隆及鉴定 | 第23页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第23-24页 |
| ·SPPV qPCR 检测方法的建立 | 第24页 |
| ·SPPV qPCR 检测方法敏感性检验 | 第24-25页 |
| ·SPPV qPCR 检测方法特异性检验 | 第25-26页 |
| ·SPPV qPCR 检测方法重复性检验 | 第26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 绵羊痘病毒 E3 蛋白的生物信息学分析 | 第28-35页 |
| ·试验材料 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28页 |
| ·试验结果 | 第28-33页 |
| ·SPPV E3L 基因序列特征分析 | 第28-29页 |
| ·SPPV E3 蛋白序列特征分析 | 第29页 |
| ·SPPV E3 蛋白亚细胞定位分析 | 第29页 |
| ·SPPV E3 蛋白疏水性分析 | 第29-30页 |
| ·痘病毒科几种重要病原的序列分析 | 第30-32页 |
| ·SPPV E3 蛋白二级结构分析 | 第32页 |
| ·绵羊痘病毒 E3 蛋白的三级结构预测 | 第32-33页 |
| ·SPPV E3 蛋白稀有密码子的分析 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| ·SPPV E3 蛋白序列特征及 E3 同源蛋白保守性分析 | 第33页 |
| ·SPPV E3 蛋白的定位 | 第33-34页 |
| ·绵羊痘病毒 E3 蛋白表达宿主菌的选择 | 第34-35页 |
| 第四章 绵羊痘病毒 E3L 基因的表达、纯化与抗体制备 | 第35-42页 |
| ·试验材料 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·试验方法 | 第35-37页 |
| ·SPPV E3L 基因的引物设计及合成 | 第35页 |
| ·SPPV E3L 基因的 PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·SPPV E3L 基因的克隆与鉴定 | 第36页 |
| ·SPPV E3L 基因原核表达载体的构建 | 第36页 |
| ·SPPV E3L 基因的诱导表达 | 第36页 |
| ·SPPV E3 重组蛋白的抗原性分析 | 第36-37页 |
| ·SPPV E3 重组蛋白的可溶性分析及纯化 | 第37页 |
| ·重组蛋白 SPPV E3 鼠抗血清的制备及鉴定 | 第37页 |
| ·试验结果 | 第37-41页 |
| ·SPPV E3L 基因的扩增、T-A 克隆及鉴定 | 第37页 |
| ·SPPV E3L 基因的原核表达载体构建 | 第37-39页 |
| ·重组蛋白 SPPV E3 的诱导表达 | 第39页 |
| ·重组蛋白 SPPV E3 的抗原性分析 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白 SPPV E3 的可溶性分析及纯化 | 第40-41页 |
| ·SPPV E3 蛋白鼠抗血清的制备与鉴定 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 绵羊痘病毒 E3 蛋白对 PKR 作用活性的探究 | 第42-49页 |
| ·试验材料 | 第42-43页 |
| ·细胞及毒株 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·试剂配制 | 第42-43页 |
| ·试验方法 | 第43-44页 |
| ·细胞的复苏、传代和冻存 | 第43页 |
| ·SPPV 干扰素敏感试验 | 第43页 |
| ·IFN-β对细胞内 PKR 表达水平的影响 | 第43页 |
| ·SPPV E3L 基因真核表达载体的构建及大量提取质粒 | 第43-44页 |
| ·pcDNA3.1(+)-SPPV E3L 在 Vero 细胞中的表达及检测 | 第44页 |
| ·瞬时表达 E3 蛋白对 polyI:C 刺激 PKR 活化中的影响 | 第44页 |
| ·试验结果 | 第44-47页 |
| ·绵羊痘病毒干扰素敏感试验 | 第44-45页 |
| ·IFN-β对细胞内 PKR 表达水平的影响 | 第45页 |
| ·SPPV E3L 基因真核表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·pcDNA3.1(+)-SPPV E3L 重组质粒转染至 Vero 细胞及 SPPV E3L 的真核表达 | 第46页 |
| ·瞬时表达 SPPV E3 蛋白对 polyI:C 刺激 PKR 活化中的影响 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·IFN-β能够显著地抑制 SPPV 的复制 | 第47-48页 |
| ·瞬时表达 SPPV E3 蛋白不能抑制 polyI:C 诱导的 PKR 活化 | 第48-49页 |
| 第六章 全文总结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56页 |
