| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-25页 |
| ·问题的提出 | 第10页 |
| ·选题背景及意义 | 第10-11页 |
| ·文献综述 | 第11-23页 |
| ·胚胎干细胞的来源、特性及其应用潜力 | 第11-13页 |
| ·胚胎干细胞命运调控的分子机制 | 第13-18页 |
| ·BMP 信号通路及其在小鼠胚胎干细胞命运决定过程中的作用 | 第18-21页 |
| ·ERK 信号及其在小鼠胚胎干细胞命运决定过程中的作用 | 第21-23页 |
| ·MKP 磷酸酶家族与 Dusp9 | 第23页 |
| ·研究方法 | 第23-24页 |
| ·论文结构安排 | 第24-25页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第25-33页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-33页 |
| ·细胞培养 | 第25-26页 |
| ·免疫印迹 | 第26页 |
| ·细胞内总 RNA 的提取、逆转录反应及 cDNA 的合成 | 第26-27页 |
| ·实时荧光定量 PCR（qRT-PCR） | 第27页 |
| ·荧光素酶报告基因实验 | 第27页 |
| ·免疫荧光 | 第27-29页 |
| ·染色质免疫沉淀（ChIP） | 第29页 |
| ·生物信息学及统计学分析 | 第29页 |
| ·碱性磷酸酶染色及群落形成实验 | 第29-30页 |
| ·质粒和 siRNA 转染小鼠胚胎干细胞 | 第30页 |
| ·用于基因过表达的慢病毒质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·用于基因过表达的慢病毒颗粒的包装和感染 | 第31页 |
| ·小鼠胚胎干细胞向神经前体细胞的分化 | 第31页 |
| ·质粒构建 | 第31-33页 |
| 第3章 BMP 信号对 ERK 信号的抑制作用 | 第33-39页 |
| ·小鼠胚胎干细胞中 BMP 信号抑制 ERK 蛋白活性 | 第33-35页 |
| ·LIF 信号增强 ERK 活性而 BMP 信号抑制其活性 | 第33-34页 |
| ·BMP 信号对 ERK 活性的抑制作用不依赖于 LIF 和 FGF 信号 | 第34-35页 |
| ·小鼠胚胎干细胞中 BMP 信号抑制 ERK 信号下游靶基因的表达 | 第35-36页 |
| ·小鼠胚胎干细胞中 BMP 信号特异性的抑制 ERK 信号 | 第36-37页 |
| ·BMP 信号不影响 JNK 和 p38 蛋白的活性 | 第36页 |
| ·BMP 信号对 ERK 活性的抑制作用只在胚胎干细胞中发生 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37页 |
| ·小结 | 第37-39页 |
| 第4章 BMP 信号特异性的上调 DUSP93030 | 第39-46页 |
| ·BMP 信号对 ERK 的抑制作用依赖于新蛋白质的合成 | 第39页 |
| ·高通量数据提示小鼠胚胎干细胞中 DUSP9 是 BMP 直接靶基因 | 第39-40页 |
| ·小鼠胚胎干细胞中 BMP 信号上调 DUSP9 的表达 | 第40-42页 |
| ·BMP 信号特异性的上调 DUSP9 | 第42-44页 |
| ·Activin 信号对 DUSP9 的表达没有影响 | 第42页 |
| ·BMP 信号对 DUSP9 的上调作用只发生在胚胎干细胞中 | 第42-44页 |
| ·BMP 信号只上调 DUSP9 而不能上调 DUSP 家族的其它成员 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第5章 BMP-DUSP9-ERK 信号传递途径的建立 | 第46-51页 |
| ·小鼠胚胎干细胞中 BMP 信号抑制 ERK 活性并上调 DUSP9 的表达 | 第46页 |
| ·小鼠胚胎干细胞中过表达 DUSP9 能够抑制 ERK 信号 | 第46-47页 |
| ·小鼠胚胎干细胞中 DUSP9 介导 BMP 信号对 ERK 信号的抑制作用 | 第47-49页 |
| ·表达 dn-DUSP9 消除了 BMP 信号对 ERK 信号的抑制作用 | 第47-48页 |
| ·RNA 干扰 DUSP9 表达消除了 BMP 信号对 ERK 活性的抑制作用 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第6章 BMP 信号调控 DUSP9 的分子机制研究 | 第51-60页 |
| ·BMP 信号对 DUSP9 的调控依赖于经典的 BMP/Smad 信号转导途径 | 第51-53页 |
| ·BMP 信号对 DUSP9 的调控作用依赖于 Smad4 | 第51-52页 |
| ·BMP 信号对 DUSP9 的调控作用依赖于 Smad1/5 | 第52-53页 |
| ·Dusp9 基因的启动子分析 | 第53-54页 |
| ·克隆的 Dusp9 基因启动子片段能够响应 BMP 信号 | 第53页 |
| ·单一核苷酸的突变消除了 Dusp9 启动子对 BMP 信号的响应 | 第53-54页 |
| ·BMP 信号促使内源 Smad 蛋白结合在 Dusp9 启动子区域 | 第54-56页 |
| ·SBE 序列在多个哺乳动物基因组中保守 | 第56-57页 |
| ·BMP 信号在人类胚胎干细胞中调控 Dusp9 | 第57页 |
| ·DUSP9 在小鼠早期胚胎中的表达依赖于 Smad4 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第7章 BMP-DUSP9-ERK 信号途径在干细胞命运决定中的作用 | 第60-72页 |
| ·BMP-DUSP9-ERK 信号途径在自我更新维持中的作用 | 第60-66页 |
| ·低 ERK 活性能够替代 BMP 信号维持自我更新 | 第60-63页 |
| ·过表达 DUSP9 能够替代 BMP 信号维持自我更新 | 第63-64页 |
| ·DUSP9 部分介导了 BMP 信号维持自我更新的作用 | 第64-66页 |
| ·BMP-DUSP9-ERK 信号途径在神经分化过程中的作用 | 第66-70页 |
| ·低 ERK 活性抑制小鼠胚胎干细胞向神经分化的过程 | 第66-67页 |
| ·过表达 DUSP9 抑制小鼠胚胎干细胞向神经分化的过程 | 第67-68页 |
| ·DUSP9 部分介导了 BMP 信号对神经分化的抑制作用 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第8章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第84页 |
