| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 名词缩写 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-25页 |
| 1 RNA沉默的发现 | 第12-13页 |
| 2 RNA沉默的作用机制 | 第13-15页 |
| 3 几种可能的沉默信号分子 | 第15-17页 |
| ·siRNA | 第15-16页 |
| ·miRNA | 第16-17页 |
| 4 信号分子的移动规律 | 第17-18页 |
| ·韧皮部蛋白协助运输沉默信号 | 第17页 |
| ·RdRP协助放大沉默信号 | 第17-18页 |
| 5 RNAi在植物研究中的应用 | 第18-20页 |
| ·RNAi在植物基因功能研究中的应用 | 第18页 |
| ·RNA沉默的两种常用技术方法及应用 | 第18-20页 |
| 6 γ-微管蛋白的结构与功能 | 第20-23页 |
| ·γ-微管蛋白的结构 | 第20-21页 |
| ·γ-微管蛋白的功能 | 第21-23页 |
| 本题的理论及实际意义 | 第23-24页 |
| 本实验技术路线 | 第24-25页 |
| 第二部分 农杆菌介导法研究烟草γ-微管蛋白基因沉默效应 | 第25-51页 |
| 1 材料和方法 | 第25-34页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·烟草总RNA的提取和γ-tubulin部分cDNA片段的克隆 | 第25页 |
| ·dsRNA载体的构建及转化 | 第25-26页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第26-27页 |
| ·农杆菌培养 | 第26页 |
| ·侵染 | 第26-27页 |
| ·共培养 | 第27页 |
| ·选择培养 | 第27页 |
| ·生根培养 | 第27页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第27-29页 |
| ·转基因烟草总DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·PCR鉴定转基因烟草 | 第28-29页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第29-31页 |
| ·Trizol法提取植物总RNA | 第29页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第29-31页 |
| ·斑点杂交鉴定转基因烟草 | 第31-32页 |
| ·探针的制备 | 第31页 |
| ·斑点杂交 | 第31-32页 |
| ·石蜡切片法观察根的细胞形态 | 第32页 |
| ·Western检测转基因植株中γ-tubulin、α-tubulin蛋白表达量变化 | 第32-34页 |
| ·烟草植株可溶性总蛋白的提取 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第33页 |
| ·转膜 | 第33页 |
| ·Western Blot | 第33-34页 |
| ·HPLC法检测组织中内源IAA的含量 | 第34页 |
| ·烟草叶片内源生长素的提取 | 第34页 |
| ·烟草内源PGP1的扩增 | 第34页 |
| 2 实验结果 | 第34-47页 |
| ·γ-tubulin cDNA的克隆 | 第34-35页 |
| ·含γ-tubulin部分cDNA片段的dsRNA载体构建成功 | 第35页 |
| ·叶盘法转基因烟草 | 第35-37页 |
| ·转基因烟草植株的筛选和鉴定 | 第37-39页 |
| ·RT-PCR检测转基因烟草中γ-tubulin转录水平的动态变化 | 第39-40页 |
| ·斑点杂交 | 第40-41页 |
| ·Western blot检测转基因烟草中γ-tubulin表达水平的变化 | 第41-42页 |
| ·植株表型出现异常 | 第42-45页 |
| ·根尖发育异常 | 第42-43页 |
| ·地上部发育异常 | 第43-45页 |
| ·内源IAA含量及生长素极性运输载体PGP1基因的表达的变化 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-51页 |
| ·γ-tubulin对植株生长发育的影响可能与对整个微管系统的破坏有关 | 第47-48页 |
| ·γ-tubulin的变化对植物生长发育的影响 | 第48-49页 |
| ·γ-tubulin基因沉默可能影响生长素的含量或极性运输 | 第49-51页 |
| 第三部分 γ-tubulin基因沉默对小孢子发生及雄配子体发育的影响 | 第51-60页 |
| 1 材料与方法 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-57页 |
| ·野生型和正对照烟草花苞的发育过程正常 | 第52-54页 |
| ·造孢时期 | 第52-53页 |
| ·小孢子母细胞时期 | 第53页 |
| ·四分体时期 | 第53页 |
| ·小孢子释放期 | 第53页 |
| ·小孢子成熟期 | 第53-54页 |
| ·经含γ-tubulin D片段的重组PVX载体侵染的烟草花苞发育异常 | 第54-57页 |
| ·经含γ-tubulin D片段的重组PVX载体侵染的烟草顶端γ-tubulin表达水平下降 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| ·γ-tubulin基因沉默导致小孢子发育过程异常 | 第57-58页 |
| ·γ-tubulin基因沉默可导致花药、花丝、花冠下端萎缩 | 第58页 |
| ·γ-tubulin基因沉默影响到雌配子体的形成 | 第58-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-73页 |
| 硕士研究生期间发表的论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
