| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-29页 |
| 第一部分 转基因动物乳腺生物反应器的研究现状与发展前景 | 第15-29页 |
| 1 用于制备转基因动物乳腺生物反应器的物种的优缺点 | 第15-16页 |
| 2 制备转基因动物的方法 | 第16-24页 |
| ·精子载体法 | 第17-20页 |
| ·精子结合外源DNA的分子机制 | 第17-18页 |
| ·精子整合外源DNA的分子机制 | 第18-19页 |
| ·外源DNA在精细胞内的存在与降解 | 第19页 |
| ·精子介导制备转基因动物的研究进展 | 第19-20页 |
| ·转基因体细胞的核移植 | 第20-24页 |
| ·不同物种的克隆 | 第20-21页 |
| ·遗传背景对核移植的影响 | 第21页 |
| ·核移植步骤对其效率的影响 | 第21页 |
| ·卵母细胞去核 | 第21页 |
| ·卵母细胞的激活 | 第21-22页 |
| ·供受体细胞间的细胞周期同步化 | 第22页 |
| ·克隆胚的体外培养 | 第22页 |
| ·核移植胚胎基因组的重编程影响核移植效率 | 第22-23页 |
| ·借助核移植技术进行的遗传操作 | 第23-24页 |
| 3 转基因动物的检测 | 第24-26页 |
| ·DNA水平的检测 | 第24-25页 |
| ·RNA水平的检测 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白的检测 | 第26页 |
| 4 转基因动物乳腺生物反应器的应用与发展前景 | 第26-29页 |
| ·动物乳腺生物反应器的概念 | 第26-27页 |
| ·动物乳腺生物反应器的应用与发展前景 | 第27-29页 |
| 实验研究 | 第29-55页 |
| 第二部分 hLF乳腺特异表达载体构建和转基因家兔制备 | 第29-45页 |
| 1 材料与方法 | 第30-35页 |
| ·材料 | 第30-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·工具酶与试剂 | 第30页 |
| ·引物合成与基因测序 | 第30-31页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·主要溶液 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·提取质粒 | 第32页 |
| ·切胶回收 | 第32页 |
| ·DNA的限制性酶切与外源DNA与质粒载体的连接反应 | 第32-33页 |
| ·pGBC5的克隆与序列分析 | 第33页 |
| ·LF基因cDNA的克隆与序列分析 | 第33页 |
| ·乳腺表达载体pGBC2LF构建 | 第33页 |
| ·家兔精子的体外转染与体外受精 | 第33-34页 |
| ·DMSO-睾丸介导制备转基因家兔 | 第34页 |
| ·转基因兔的PCR和Southern blot检测 | 第34-35页 |
| ·LF的ELISA检测 | 第35页 |
| ·统计学分析 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-41页 |
| ·人LF基因cDNA和山羊β-casein基因5’调控序列的克隆与分析 | 第35-36页 |
| ·pGBC2LF载体的构建与鉴定 | 第36-37页 |
| ·家兔精子的外源基因转染与体外受精 | 第37-38页 |
| ·DMSO-睾丸介导制备转基因家兔 | 第38-41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| ·乳腺表达载体的构件及目的蛋白的选择 | 第41-42页 |
| ·精子介导的基因转移 | 第42-43页 |
| ·精子介导基因转移的影响因素 | 第43-44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 第三部分 山羊体细胞的外源基因转染与转基因体细胞核移植 | 第45-54页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·培养液和细胞因子 | 第45页 |
| ·细胞与胚胎培养系统 | 第45页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·大量提取表达质粒pGBC2LF | 第46页 |
| ·表达载体pGBC2LF转染山羊胎儿成纤维细胞 | 第46页 |
| ·阳性细胞克隆的挑取 | 第46-47页 |
| ·阳性细胞克隆DNA的制备 | 第47页 |
| ·PCR和Southern blot检测阳性细胞克隆 | 第47页 |
| ·山羊卵母细胞的收集与体外培养 | 第47页 |
| ·山羊卵母细胞的体外培养 | 第47-48页 |
| ·山羊体细胞的核移植 | 第48页 |
| ·核移植胚的激活与体外培养 | 第48页 |
| ·统计学分析 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-52页 |
| ·外源基因转染山羊胎儿成纤维细胞 | 第48-49页 |
| ·阳性细胞克隆的检测与染色体核型分析 | 第49-50页 |
| ·羊卵母细胞的体外培养与核移植 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| ·体细胞的外源基因转染及其影响因素 | 第52页 |
| ·转基因体细胞的核移植及其影响因素 | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53-54页 |
| 第四部分 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 个人简介 | 第65-67页 |
| 导师组意见 | 第67-68页 |
