| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-11页 |
| 第一章 癌症研究现状和癌症靶向基因病毒治疗的概述 | 第11-20页 |
| ·癌症治疗的研究现状 | 第11-12页 |
| ·溶瘤腺病毒的发展与研究概述 | 第12-15页 |
| ·腺病毒的结构特点及腺病毒载体的应用优势和分类 | 第12-14页 |
| ·肿瘤特异性增殖腺病毒的构建策略 | 第14-15页 |
| ·ZD55 概述 | 第15页 |
| ·GADD45 基因概述 | 第15-19页 |
| ·实验目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 分别携带 GADD45α、GADD45γ 基因的溶瘤腺病毒在肿瘤 治疗中的研究 | 第20-55页 |
| ·实验材料 | 第20-26页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第20-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·腺病毒 | 第21页 |
| ·抗体 | 第21页 |
| ·细胞株 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22-23页 |
| ·合成引物序列 | 第23-24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-40页 |
| ·获取SW620 总RNA | 第26页 |
| ·将mRNA 逆转录为cDNA（所有未注明操作均在冰上进行） | 第26页 |
| ·以 SW620 cDNA 为模板，PCR 扩增Gadd45α、GADD45γ基因并电泳回收 | 第26-28页 |
| ·基因片段与pMD18-T 载体的连接 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第29页 |
| ·质粒pCA13-GADD45α、pCA13-GADD45γ的构建 | 第29-30页 |
| ·质粒pZD55-GADD45α、pZD55--GADD45γ的构建 | 第30-32页 |
| ·重组腺病毒的包装、纯化、扩增和滴定 | 第32-36页 |
| ·重组腺病毒的包装 | 第32-33页 |
| ·重组病毒的小量扩增 | 第33页 |
| ·重组病毒ZD55-GADD45α、ZD55 --GADD45γ鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组病毒的大量制备与CsCl 梯度离心纯化病毒 | 第34-35页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第35-36页 |
| ·溶瘤腺病毒ZD55-GADD45α、ZD55 --GADD45γ体外抗瘤效果评价 | 第36-37页 |
| ·MTT 检测ZD55-GADD45α、ZD55 --GADD45γ对细胞的毒性 | 第36-37页 |
| ·细胞病变效应（CPE）实验 | 第37页 |
| ·溶瘤腺病毒ZD55 – GADD45α、ZD55 --GADD45γ抗瘤机制研究 | 第37-40页 |
| ·Hoechst 33258 染色观察细胞凋亡 | 第37页 |
| ·Western blotting 测定 GADD45γ 及相关蛋白的表达 | 第37-40页 |
| ·统计学分析 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-53页 |
| ·GADD45α、GADD45γ 基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·pCA13-GADD45α、pCA13-GADD45γ 的构建及鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·质粒 pZD55-GADD45α、pZD55--GADD45γ 的构建及鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·ZD55-GADD45α、ZD55 --GADD45γ 病毒包装、扩增及鉴定结果 | 第43-45页 |
| ·MTT 实验检测各病毒处理后细胞的存活率 | 第45-49页 |
| ·细胞病变效应(CPE)实验进一步检测病毒的抑瘤效果和毒副作用 | 第49-51页 |
| ·重组病毒 ZD55-Gadd45α 在人结肠癌细胞 SW620 中的内在杀伤机制 | 第51-52页 |
| ·Western blot 检测凋亡通路中关键蛋白的表达 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
