中文摘要 | 第1-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
缩略词表 | 第12-15页 |
第一章:掌叶半夏凝集素(PPA)治疗肿瘤的前景 | 第15-24页 |
·植物凝集素的概述 | 第15页 |
·植物凝集素对医疗行业的贡献 | 第15-16页 |
·掌叶半夏凝集素的现状及概况 | 第16页 |
·掌叶半夏凝集素的抗肿瘤研究 | 第16-17页 |
·现阶段肿瘤的研究进展 | 第17-22页 |
·肿瘤的基因治疗 | 第17-19页 |
·survivin 与肿瘤靶向 | 第19-21页 |
·肿瘤治疗基因PPA 在肿瘤治疗中的应用 | 第21-22页 |
·实验方案设计 | 第22-24页 |
·实验目的和意义 | 第22页 |
·研究内容 | 第22-23页 |
·技术路线图 | 第23-24页 |
第二章:细胞内表达掌叶半夏凝集素基因抗肿瘤作用的机制 | 第24-56页 |
·实验材料 | 第24-27页 |
·生化试剂及主要仪器 | 第24-26页 |
·主要质粒、菌株及细胞株 | 第26页 |
·引物 | 第26-27页 |
·实验方法 | 第27-42页 |
·携带PPA 部分基因的真核表达载体构建 | 第27-31页 |
·PEGFP-PPA(Domain A)-C1 载体构建 | 第27-31页 |
·PEGFP-PPA(Domain B)-C1 载体构建 | 第31页 |
·pcDNA3/flag 以及pcDNA3/flag-PPA 载体构建 | 第31页 |
·细胞内表达基因片段PPA(DomainA、DomainB)亚细胞定位 | 第31-32页 |
·Western blot 检测PPA 在肿瘤细胞中的表达 | 第32-35页 |
·Co-IP、Pulldown 和蛋白染色寻找与PPA 相互作用的蛋白 | 第35-38页 |
·Western Blot 验证互作蛋白的相互作用 | 第38页 |
·PPA 诱导的肿瘤细胞死亡的检测 | 第38-42页 |
·非复制型腺病毒的包装、纯化、扩增和滴定 | 第38-41页 |
·MTT 法检测肿瘤细胞的存活率 | 第41页 |
·结晶紫染色观察病毒对肿瘤细胞的杀伤 | 第41-42页 |
·实验结果 | 第42-54页 |
·真核表达载体的构建及鉴定结果 | 第42-44页 |
·携带PPA 基因片段的pEGFP-PPAn-C1 载体构建及鉴定结果(n=A、A1、A2 和B、B1、B2 | 第42-43页 |
·pcDNA3/flag-PPA 载体构建的结果 | 第43页 |
·Ad.Surp-PPA 病毒的构建与鉴定 | 第43-44页 |
·携带PPA 基因片段的质粒在细胞内表达的形态观察 | 第44-48页 |
·Western blot 检测PPA 在信号通路方面诱导的细胞死亡 | 第48-49页 |
·CO-IP,Pulldown 找与PPA 相互作用的蛋白 | 第49-51页 |
·Western blot 验证相互作用的蛋白 | 第51-52页 |
·MTT 法检测非复制型病毒Ad.Surp-PPA 对肿瘤细胞的体外杀伤效果 | 第52-53页 |
·结晶紫实验分析非复制型病毒Ad.Surp-PPA 对肿瘤细胞的毒性 | 第53-54页 |
·讨论与展望 | 第54-56页 |
结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-60页 |
致谢 | 第60-61页 |
硕士研究生期间的研究成果 | 第61页 |
硕士研究生期间参与项目与奖励 | 第61页 |