| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| Ⅰ文献综述 | 第8-20页 |
| 1 肿瘤的生长、转移与血管生成的关系 | 第8-11页 |
| 1．1 肿瘤的生长过程 | 第8-9页 |
| 1．2 肿瘤的转移机制 | 第9页 |
| 1．3 肿瘤的生长、转移与血管生成的关系 | 第9-11页 |
| 2 肿瘤血管生长抑制因子与肿瘤的抗血管生成疗法 | 第11-14页 |
| 2．1 肿瘤血管生长抑制因子 | 第11-13页 |
| 2．2 肿瘤的抗血管生成疗法 | 第13-14页 |
| 3 肿瘤血管生长抑制因子kringle5 | 第14-19页 |
| 3．1 肿瘤血管生长抑制因子kringle5的结构 | 第14-15页 |
| 3．2 Kringle5抑制血管增生的分子机制 | 第15-18页 |
| 3．2．1 K5与内皮细胞的迁移、增殖和凋亡 | 第15-16页 |
| 3．2．2 K5与血管增生平衡 | 第16-17页 |
| 3．2．3 K5与炎性反应 | 第17-18页 |
| 3．3 Kringle5对血管增生性疾病治疗的实验研究 | 第18页 |
| 3．4 Kringle5的基因工程药物开发及应用 | 第18-19页 |
| 4 本研究的意义 | 第19页 |
| 5 研究开发的方向和重点 | 第19-20页 |
| Ⅱ 实验部分 | 第20-31页 |
| 1 试剂与仪器 | 第20-21页 |
| 1．1 试剂 | 第20页 |
| 1．2 菌株及质粒 | 第20页 |
| 1．3 培养基 | 第20页 |
| 1．4 仪器 | 第20-21页 |
| 2 工艺研究 | 第21-27页 |
| 2．1 发酵工艺的优化 | 第21-26页 |
| 2．1．1 培养基的优化 | 第22-24页 |
| 2．1．2 工程菌生长曲线的确定 | 第24-25页 |
| 2．1．3 摇瓶发酵工艺的优化 | 第25页 |
| 2．1．4 发酵罐分批培养溶氧的确定 | 第25页 |
| 2．1．5 发酵罐中分批培养 | 第25-26页 |
| 2．2 K5蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 2．2．1 Cu~2+螯合的Sepharose Fast Flow层析 | 第26页 |
| 2．2．2 Sephadex G25柱层析 | 第26-27页 |
| 2．2．3 CM Sepharose CL 6B阳离子交换层析 | 第27页 |
| 3 分析与检测 | 第27-31页 |
| 3．1 菌体浓度的测定 | 第27页 |
| 3．2 葡萄糖浓度测定 | 第27-28页 |
| 3．3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第28页 |
| 3．3．1 样品处理 | 第28页 |
| 3．3．2 SDS-PAGE电泳条件 | 第28页 |
| 3．4 蛋白浓度分析 | 第28-29页 |
| 3．5 K5生物活性测定 | 第29-31页 |
| Ⅲ 结果与讨论 | 第31-45页 |
| 1 工艺研究结果与讨论 | 第31-39页 |
| 1．1 发酵工艺的优化 | 第31-37页 |
| 1．1．1 培养基的优化 | 第31-32页 |
| 1．1．2 工程菌生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| 1．1．3 摇瓶发酵工艺的优化 | 第33-34页 |
| 1．1．4 发酵罐分批培养溶氧的确定 | 第34-36页 |
| 1．1．5 发酵罐中分批培养 | 第36-37页 |
| 1．2 K5蛋白的纯化 | 第37-39页 |
| 1．2．1 Cu~2+螯合的Sepharose Fast Flow层析 | 第37-38页 |
| 1．2．2 Sephadex G25柱层析 | 第38页 |
| 1．2．3 CM Sepharose CL 6B阳离子交换层析 | 第38-39页 |
| 2 分析与检测实验结果与讨论 | 第39-45页 |
| 2．1 葡萄糖浓度测定 | 第39-40页 |
| 2．2 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 2．3 纯化K5溶液蛋白浓度测定 | 第41-43页 |
| 2．4 K5活性测定 | 第43-45页 |
| Ⅳ 结论 | 第45-51页 |
| 1 结论 | 第45页 |
| 2 存在的主要问题 | 第45-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
