| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·分子模拟技术 | 第8-10页 |
| ·分子模拟技术的兴起 | 第8页 |
| ·结构模拟方法 | 第8-10页 |
| ·结构优化方法 | 第10页 |
| ·粒细胞集落刺激因子 | 第10-12页 |
| ·粒细胞集落刺激因子概况 | 第10页 |
| ·粒细胞集落刺激因子的生物学性质 | 第10页 |
| ·粒细胞集落刺激因子基因和蛋白 | 第10-11页 |
| ·粒细胞集落刺激因子生理活性及作用机理 | 第11页 |
| ·粒细胞集落刺激因子的临床应用 | 第11-12页 |
| ·长效重组蛋白 | 第12-13页 |
| ·研究背景 | 第12页 |
| ·构建突变体 | 第12页 |
| ·PEG 化学修饰 | 第12-13页 |
| ·基因融合 | 第13页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第13-15页 |
| ·蛋白分泌作用 | 第13-14页 |
| ·翻译后修饰作用 | 第14页 |
| ·选择性启动子 | 第14页 |
| ·基因整合方式 | 第14-15页 |
| ·外源蛋白稳定性 | 第15页 |
| ·立题背景及研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 融合蛋白的分子设计 | 第16-23页 |
| ·GCSF 活性位点 | 第16-17页 |
| ·GCSF 晶体结构 | 第16-17页 |
| ·GCSF 活性位点 | 第17页 |
| ·实验仪器 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-19页 |
| ·GCSF 结构模拟 | 第18页 |
| ·HSA-GCSF 结构模拟 | 第18页 |
| ·HSA-GCSF 突变体结构模拟 | 第18-19页 |
| ·结果 | 第19-22页 |
| ·GCSF 结构模拟 | 第19-20页 |
| ·HSA-GCSF 结构模拟 | 第20页 |
| ·HSA-GCSF 突变体结构模拟 | 第20-21页 |
| ·HSA-GCSFm 与GCSF 信号传导复合物的比较 | 第21-22页 |
| ·讨论 | 第22页 |
| ·小结 | 第22-23页 |
| 第三章 表达载体PPIC9K-HSA-HGCSFM的构建 | 第23-32页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·菌种与质粒 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·工具酶 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·质粒pUC57-hGCSF~m和pBlu2KSP-HSA 的提取 | 第24-25页 |
| ·质粒pUC57-hGCSF~m和pBlu2KSP-HSA 的SauI 和NotI 消化 | 第25页 |
| ·线性化pBlu2KSP-HSA 和hG-CSF~m片段的纯化 | 第25页 |
| ·线性化pBlu2KSP-HSA 和hG-CSF~m片段的连接 | 第25-26页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| ·重组质粒pBlu2KSP-HSA-hGCSF~m的鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒pBlu2KSP-HSA-hGCSF~m的序列测定 | 第27页 |
| ·表达载体pPIC9K-HSA-hGCSF~m的构建 | 第27页 |
| ·表达载体pPIC9K-HSA-hGCSFm的鉴定：参见3.2.6 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-31页 |
| ·重组质粒pBlu2KSP-HSA-hGCSF~m的构建 | 第27-29页 |
| ·重组质粒pBlu2KSP-HSA-hGCSF~m的序列测定 | 第29页 |
| ·表达载体pPIC9K-HSA-hGCSF~m的构建 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第四章 毕赤酵母工程菌的构建与表达产物鉴定 | 第32-39页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·菌株、质粒、细胞株 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·工具酶与试剂 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-36页 |
| ·结果 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 论文总结 | 第39-40页 |
| 一、主要结论 | 第39页 |
| 二、存在问题与展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
