| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 1. 引言 | 第8-15页 |
| ·基因沉默的概述 | 第8-10页 |
| ·转录后基因沉默(PTGS) | 第8-9页 |
| ·植物中PTGS的分子机理 | 第9-10页 |
| ·PTGS诱导技术在植物转化中的应用 | 第10页 |
| ·番茄的抗除草剂基因工程 | 第10-12页 |
| ·抗除草剂bar基因 | 第11页 |
| ·根癌农杆菌Ti质粒介导番茄转化 | 第11-12页 |
| ·番茄类胡萝卜素代谢 | 第12-14页 |
| ·类胡萝卜素概述 | 第12-13页 |
| ·类胡萝卜素代谢途径中番茄红素的作用 | 第13-14页 |
| ·番茄红素β-环化酶(LYC-b) | 第14页 |
| ·本研究的背景、目的和意义 | 第14-15页 |
| 2. 材料与方法 | 第15-27页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·植物材料 | 第15页 |
| ·质粒和菌种 | 第15页 |
| ·化学试剂 | 第15页 |
| ·PCR引物 | 第15-16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-27页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第16-20页 |
| ·番茄红素β-环化酶基因(Lyc-b)的克隆 | 第16-18页 |
| ·用于构建ihpRNA载体目的片段PCR扩增 | 第18页 |
| ·目的片段与质粒pDon221 BP反应 | 第18-19页 |
| ·酶切片段与质粒pJawoh18 LR反应 | 第19-20页 |
| ·植物基因沉默载体的转化 | 第20页 |
| ·农杆菌介导的番茄转化 | 第20-21页 |
| ·番茄无菌苗的获得 | 第20页 |
| ·预培养 | 第20-21页 |
| ·农杆菌培养 | 第21页 |
| ·农杆菌侵染及共培养 | 第21页 |
| ·一周的恢复培养 | 第21页 |
| ·选择培养 | 第21页 |
| ·生根 | 第21页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第21-22页 |
| ·植物基因组 DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·基因组 DNA的 PCR检测 | 第22页 |
| ·转基因植株的RNA水平检测 | 第22-23页 |
| ·转基因植株的蛋白水平检测 | 第23-26页 |
| ·Lycb的TA克隆 | 第23页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)-b的构建 | 第23-25页 |
| ·Lycb基因在大肠杆菌中的诱导表达及分离纯化 | 第25-26页 |
| ·Lycb融合蛋白多克隆抗体的制备 | 第26页 |
| ·植物总蛋白的提取 | 第26页 |
| ·再生植株的Basta抗性测试 | 第26-27页 |
| 3. 结果 | 第27-37页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第27-31页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·番茄红素β-环化酶基因的克隆 | 第27页 |
| ·番茄红素β-环化酶基因的TA克隆 | 第27-28页 |
| ·DNA测序及分析 | 第28页 |
| ·中间载体pDon221-b与表达载体pJawoh18-26的构建 | 第28-31页 |
| ·植物表达载体pJawoh18-26转化农杆菌LBA1100 | 第31页 |
| ·农杆菌介导的黄洋梨番茄转化 | 第31-32页 |
| ·转基因植株基因组 DNA的PCR检测结果 | 第32-33页 |
| ·转基因植株的RNA水平检测结果 | 第33页 |
| ·转基因再生植株的Basta抗性检测结果 | 第33-34页 |
| ·转基因再生植株的果实中番茄红素β-环化酶沉默 | 第34-35页 |
| ·转基因植株的蛋白水平检测结果 | 第35-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-39页 |
| ·番茄红素β-环化酶基因沉默载体的构建 | 第37页 |
| ·番茄稳定转化pJawoh18-2b沉默载体的系统优化 | 第37页 |
| ·转番茄红素β-环化酶基因沉默载体的番茄的获得及鉴定 | 第37-39页 |
| 5. 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 致谢 | 第43页 |
