| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一部分 前言 | 第7-19页 |
| 1 白藜芦醇的研究进展 | 第7-10页 |
| ·白藜芦醇的存在和含量 | 第7页 |
| ·白藜芦醇的化学结构和性质 | 第7-8页 |
| ·白藜芦醇的生理活性作用 | 第8-9页 |
| ·白藜芦醇的生物合成 | 第9-10页 |
| 2 4-香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)的研究进展 | 第10-13页 |
| ·苯丙烷类代谢途径研究 | 第10-11页 |
| ·4-香豆酸:辅酶A连接酶同工酶的生化性质 | 第11-12页 |
| ·4CL基因家族 | 第12页 |
| ·4-香豆酸:辅酶A连接酶表达及调控 | 第12-13页 |
| 3 白藜芦醇的生物技术研究进展 | 第13-15页 |
| ·白藜芦醇合酶的基因工程研究进展 | 第13-14页 |
| ·利用细胞工程方法生产白藜芦醇 | 第14页 |
| ·利用基因工程菌生产白藜芦醇 | 第14-15页 |
| 4 酵母表达系统研究 | 第15-17页 |
| ·酵母表达系统的优点 | 第16-17页 |
| ·影响酵母表达系统表达和应用的因素 | 第17页 |
| 5 课题研究的目的、意义和内容 | 第17-19页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第19-34页 |
| 1 主要试剂及仪器 | 第19-23页 |
| ·基本试剂及生产厂家 | 第19页 |
| ·酶及其它试剂 | 第19页 |
| ·质粒和菌株 | 第19页 |
| ·主要仪器和厂家 | 第19-20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·溶液配方 | 第21-23页 |
| 2 实验材料 | 第23页 |
| 3 实验方法 | 第23-34页 |
| ·拟南芥的培养 | 第23页 |
| ·磁珠法提取拟南芥总RNA | 第23-24页 |
| ·RNA含量及质量检测 | 第24页 |
| ·RT-PCR法克隆4CL基因编码序列 | 第24-25页 |
| ·克隆载体pGEM-TEasy-4CL构建及检测 | 第25-28页 |
| ·酵母表达载体pPIC3.5K-4CL的构建及检测 | 第28-34页 |
| 第三部分 实验结果 | 第34-44页 |
| 1 4-香豆酸:辅酶A连接酶基因cDNA序列的克隆 | 第34-36页 |
| ·拟南芥中提取总RNA | 第34页 |
| ·利用内参来判断RNA的提取质量 | 第34-35页 |
| ·4-香豆酸:辅酶A连接酶基因的获得 | 第35-36页 |
| 2 克隆载体pGEM-TEasy-4CL的检测 | 第36-37页 |
| ·pGEM-TEasy-4CL的PCR检测 | 第36页 |
| ·pGEM-TEasy-4CL的酶切检测 | 第36-37页 |
| 3 目的基因的测序 | 第37-41页 |
| ·目的基因的测序结果 | 第37-41页 |
| 4 酵母表达载体pPIC3.5K-4CL的鉴定 | 第41-43页 |
| ·酵母表达载体pPIC3.5K-4CL的构建流程 | 第41页 |
| ·pPIC3.5K-4CL的双酶切鉴定 | 第41-43页 |
| 5 酵母转化子的筛选及鉴定 | 第43-44页 |
| ·营养缺陷型筛选和G418抗生素筛选 | 第43页 |
| ·酵母转化子的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 第四部分 讨论 | 第44-46页 |
| 1 金磁微球法提取拟南芥总RNA | 第44页 |
| 2 RT-PCR克隆4-香豆酸:辅酶A连接酶基因 | 第44页 |
| 3 关于PCR的内参基因 | 第44-46页 |
| 第五部分 小结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53页 |