| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| ·PED 概述 | 第16-21页 |
| ·PEDV 的形态结构 | 第16-17页 |
| ·PEDV 理化特性 | 第17页 |
| ·PEDV 抗原性 | 第17页 |
| ·PEDV 细胞培养特性 | 第17页 |
| ·PEDV 病毒学分类地位 | 第17页 |
| ·PEDV 的基因组结构和复制 | 第17-19页 |
| ·PEDV 基因组编码蛋白及其功能 | 第19-21页 |
| ·冠状病毒一些成员的核衣壳蛋白亚细胞定位的研究进展 | 第21-25页 |
| ·核仁的结构和组成 | 第21-22页 |
| ·与病毒蛋白定位相关的定位信号特征 | 第22-23页 |
| ·冠状病毒各群代表成员 N 蛋白的定位特征 | 第23-25页 |
| ·N 蛋白细胞核定位的功能特点 | 第25页 |
| ·共聚焦显微镜技术在生命科学领域的应用 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白的生物信息学分析 | 第28-35页 |
| ·材料与方法 | 第28页 |
| ·N 蛋白的等电点，分子量和氨基酸组成的分析 | 第28页 |
| ·N 蛋白的亲水性分析 | 第28页 |
| ·核定位信号的预测 | 第28页 |
| ·序列比对分析 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-34页 |
| ·基本组分分析 | 第28页 |
| ·亲水性分析 | 第28-29页 |
| ·核定位信号 NLS 的预测结果 | 第29-30页 |
| ·PEDV N 蛋白与冠状病毒属其它成员的多序列比对结果 | 第30-32页 |
| ·将 PEDV 不同毒株的 N 蛋白进行 T-COFFEE 分析结果 | 第32-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 N 蛋白多克隆抗体的制备以及病毒感染细胞中 N 蛋白的细胞内定位特征 | 第35-41页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·病毒与细胞 | 第35页 |
| ·质粒和菌种 | 第35页 |
| ·生化试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·细胞培养 | 第35页 |
| ·N 蛋白的诱导表达和纯化 | 第35-36页 |
| ·N 蛋白多克隆抗体的制备 | 第36页 |
| ·病毒感染细胞中 N 蛋白的细胞定位 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-40页 |
| ·N 蛋白的表达与纯化 | 第37页 |
| ·N 蛋白的 Western blot 分析结果 | 第37-38页 |
| ·IFA 分析结果 | 第38页 |
| ·共聚焦分析结果 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 N 蛋白的单独表达以及其亚细胞定位分析 | 第41-52页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·病毒与细胞 | 第41页 |
| ·质粒与菌种 | 第41页 |
| ·生化试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-47页 |
| ·细胞培养 | 第41-42页 |
| ·PEDV 病毒 N 基因 RNA 的提取 | 第42页 |
| ·N 基因cDNA 合成 | 第42页 |
| ·N 基因的获得 | 第42-43页 |
| ·纯化回收 | 第43页 |
| ·包含 N 基因的真核表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·转染 Vero E6 细胞 | 第45-46页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第46页 |
| ·Western blot 分析 | 第46页 |
| ·共聚焦显微镜分析 | 第46页 |
| ·N 蛋白的表达对细胞周期的影响 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·N 基因的获得 | 第47页 |
| ·真核表达载体的构建以及鉴定 | 第47页 |
| ·pcDNA-N 在哺乳动物细胞 Vero E6 细胞中的表达 | 第47-48页 |
| ·N 蛋白的亚细胞定位特征的共聚焦分析结果 | 第48-49页 |
| ·N 蛋白的表达对细胞周期的影响 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 核仁定位相关结构域以及预测信号功能的初步分析 | 第52-64页 |
| ·材料 | 第52-54页 |
| ·细胞 | 第52页 |
| ·载体与受体菌 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·引物 | 第52-54页 |
| ·方法 | 第54-58页 |
| ·N 基因的分区域扩增 | 第54页 |
| ·对预测的核定位信号（或核仁定位信号）的扩增 | 第54-55页 |
| ·N 基因全长和区域Ⅱ中 Pat 基序缺失的扩增 | 第55-56页 |
| ·细胞核核仁成分核磷酸蛋白 B23.1 基因的扩增 | 第56-57页 |
| ·扩增片段和载体的酶切 | 第57页 |
| ·构建真核表达载体 | 第57页 |
| ·共转染 Vero E6 细胞 | 第57页 |
| ·Western blot 分析 | 第57-58页 |
| ·共聚焦显微镜分析 | 第58页 |
| ·结果 | 第58-62页 |
| ·不同片段基因的扩增 | 第58页 |
| ·真核表达载体构建 | 第58-59页 |
| ·Western blot 分析 | 第59页 |
| ·共聚焦分析结果 | 第59-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 B23.1 蛋白的原核表达 | 第64-69页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·菌体和载体 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·引物 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-65页 |
| ·目的基因的获得 | 第64-65页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第65页 |
| ·重组蛋白诱导表达及条件优化 | 第65页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第65页 |
| ·Western Blot 检测 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-67页 |
| ·目的基因的获得 | 第65-66页 |
| ·重组质粒的构建 | 第66页 |
| ·重组蛋白的表达鉴定与纯化 | 第66-67页 |
| ·Western blot 分析 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第七章 全文结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简 历 | 第78页 |
