| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1.引言 | 第10-21页 |
| ·细小病毒科简介 | 第10-11页 |
| ·细小病毒科的特征和分类 | 第10页 |
| ·细小病毒基因组结构特征 | 第10-11页 |
| ·人细小病毒B19介绍 | 第11-13页 |
| ·细小病毒B19的发现 | 第11页 |
| ·细小病毒B19分子生物学特征 | 第11-12页 |
| ·细小病毒B19感染与疾病 | 第12-13页 |
| ·细小病毒VP1独特区的磷脂酶A2活性研究 | 第13-16页 |
| ·磷脂酶A2简介 | 第13页 |
| ·细小病毒VP1独特区磷脂酶A2活性的研究 | 第13-15页 |
| ·B19病毒VP1独特区与磷脂酶A2的活性的研究 | 第15-16页 |
| ·PCR介导的定点突变 | 第16-17页 |
| ·PMAL~(TM)原核表达系统 | 第17-18页 |
| ·pMALTM原核表达系统简介 | 第17页 |
| ·质粒pMAL-c2x(AmpR)的相关信息及克隆策略 | 第17-18页 |
| ·应用pMALTM原核表达系统进行本实验的具体方案(如图6) | 第18页 |
| ·磷脂酶A2活性的测定原理 | 第18-20页 |
| ·研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2.实验材料和方法 | 第21-30页 |
| ·主要实验材料 | 第21页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·药品和试剂 | 第21页 |
| ·常用溶液及配制(见表1) | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·氯化锂法提取质粒DNA | 第21-23页 |
| ·PCR的扩增 | 第23-24页 |
| ·限制性内切酶Dpn Ⅰ筛选突变PCR产物 | 第24页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第24-25页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·融合蛋白的诱导表达分析 | 第26-27页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第27页 |
| ·MBP-VP1u(未突变和突变)融合蛋白的分离纯化 | 第27-28页 |
| ·MBP-VP1u多克隆抗体的制备 | 第28-29页 |
| ·多克隆抗体Western Blotting检测免疫学活性 | 第29页 |
| ·磷脂酶A2活性测定 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-42页 |
| ·VP1U序列的克隆与重组质粒的鉴定 | 第30-34页 |
| ·重组质粒pMAL-VP1u的构建和酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pMAL-mVP1u的构建和酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·目的片段测序结果 | 第32-34页 |
| ·MBP-VP1U(未突变和突变)融合蛋白的诱导表达及表达条件的优化 | 第34-36页 |
| ·融合蛋白MBP-VP1u的诱导表达 | 第34页 |
| ·融合蛋白MBP-mVP1u的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白MBP-VP1u表达条件的优化 | 第35-36页 |
| ·MBP-VP1u(未突变和突变)融合蛋白的纯化及酶切 | 第36-39页 |
| ·MBP-VP1u融合蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·Factor Xa酶切融合蛋白MBP-VP1u | 第36-37页 |
| ·MBP-mVP1u融合蛋白的纯化 | 第37页 |
| ·融合蛋白溶度测定 | 第37-39页 |
| ·MBP-VP1u特异性抗体的WESTERN-BLOTTING检测 | 第39页 |
| ·磷脂酶A2活性的测定 | 第39-42页 |
| ·B19 VP1u磷脂酶A2活性的测定 | 第39-40页 |
| ·关键氨基酸突变B19 VP1u磷脂酶A2活性的测定 | 第40-42页 |
| 4. 讨论和展望 | 第42-46页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·应用pMALTM原核表达系统制备B19 VP1独特区多克隆抗体 | 第42-43页 |
| ·B19 VP1独特区磷脂酶A2活性的测定 | 第43-44页 |
| ·展望 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录 | 第50页 |
| 本文缩写词 | 第50-51页 |
| 在校期间发表的论文、科研成果等 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
