| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 植物中miRNA概述 | 第15-19页 |
| 1.1.1 药用植物中miRNA研究 | 第16-17页 |
| 1.1.2 miRNA与药用植物的次生代谢 | 第17-19页 |
| 1.2 miRNA与激素信号 | 第19-20页 |
| 1.3 丹参中miRNA的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 丹参连作障碍 | 第21页 |
| 1.4.1 丹参连作障碍的研究现状 | 第21页 |
| 1.4.2 miRNA与丹参连作障碍 | 第21页 |
| 1.5 丹参次生代谢物合成路径及调控 | 第21-24页 |
| 1.6 本项目研究的目的与意义 | 第24-27页 |
| 第二章 响应丹参连作障碍miRNAs的鉴定 | 第27-47页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 材料、试剂与仪器 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2.4 引物 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.3.1 丹参根总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.3.2 丹参miRNA的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 响应丹参连作障碍miRNA鉴定 | 第31页 |
| 2.3.4 miRNA靶基因的预测和评价 | 第31页 |
| 2.3.5 Quantitative RT-PCR analysis | 第31-33页 |
| 2.3.6 HPLC检测丹参酮、丹酚酸含量 | 第33页 |
| 2.4 实验结果 | 第33-45页 |
| 2.4.1 丹参根中s RNA的深度测序 | 第33-34页 |
| 2.4.2 丹参中已知miRNAs的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.3 丹参中新miRNA的鉴定 | 第35-38页 |
| 2.4.4 响应丹参连作障碍miRNAs的筛选 | 第38-41页 |
| 2.4.5 差异miRNAs靶基因分析 | 第41-43页 |
| 2.4.6 连作障碍对丹参植株生长发育的影响 | 第43-44页 |
| 2.4.7 连作障碍对丹参次生代谢产物合成的影响 | 第44-45页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第45-47页 |
| 2.5.1 药用植物miRNA响应丹参的连作障碍 | 第45-46页 |
| 2.5.2 miRNA响应丹参连作障碍及其对丹参次生代谢产物合成的影响 | 第46页 |
| 2.5.3 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 Smi-miR164a过表达提高丹参对化感物质的耐受及对次生代谢产物合成的影响 | 第47-67页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 材料、试剂与仪器 | 第47-49页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第48页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第48页 |
| 3.2.4 引物 | 第48-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-53页 |
| 3.3.1 总RNA提取及反转录 | 第49-50页 |
| 3.3.2 Smi-miR164a的组织特异性表达及靶基因分析 | 第50页 |
| 3.3.3 Smi-miR164a过表达转基因毛状根的获得 | 第50-53页 |
| 3.3.4 Smi-miR164a转基因毛状根对化感物质的耐受实验 | 第53页 |
| 3.3.5 Smi-miR164a对毛状根生物量及次生代谢产物合成的影响 | 第53页 |
| 3.4 实验结果 | 第53-65页 |
| 3.4.1 Smi-miR164a组织表达特异性分析 | 第53-54页 |
| 3.4.2 Smi-miR164a靶基因分析 | 第54-55页 |
| 3.4.3 miR164a转基因毛状根的获得 | 第55-57页 |
| 3.4.4 miR164a过表达植株对化感物质的耐受研究 | 第57-61页 |
| 3.4.5 过表达miR164a转基因毛状根生长受到抑制 | 第61-62页 |
| 3.4.6 过表达miR164a转基因毛状根对丹参次生代谢物合成的影响 | 第62-65页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第65-67页 |
| 3.5.1 讨论 | 第65-66页 |
| 3.5.2 小结 | 第66-67页 |
| 第四章 SmNAC2和SmNAC3的分子克隆及对丹参次生代谢物合成的影响 | 第67-84页 |
| 4.1 引言 | 第67页 |
| 4.2 材料、试剂与仪器 | 第67-70页 |
| 4.2.1 菌株及载体 | 第67页 |
| 4.2.2 主要仪器及试剂 | 第67-68页 |
| 4.2.3 引物 | 第68-70页 |
| 4.3 实验方法 | 第70-71页 |
| 4.3.1 植物材料获得 | 第70页 |
| 4.3.2 SmNAC2和SmNAC3基因的分子克隆与序列分析 | 第70页 |
| 4.3.3 SmNAC2和SmNAC3原核表达研究 | 第70-71页 |
| 4.3.4 SmNAC2和SmNAC3过表达和RNAi载体的构建 | 第71页 |
| 4.4 实验结果 | 第71-83页 |
| 4.4.1 SmNAC2和SmNAC3基因的克隆与生物信息学分析 | 第71-74页 |
| 4.4.2 SmNAC2和SmNAC3蛋白原核表达 | 第74-75页 |
| 4.4.3 SmNAC2和SmNAC3组织特异性表达 | 第75页 |
| 4.4.4 SmNAC2和SmNAC3过表达及RNAi沉默转基因毛状根分析 | 第75-77页 |
| 4.4.5 SmNAC2和SmNAC3对丹酚酸积累的影响 | 第77-79页 |
| 4.4.6 SmNAC2和SmNAC3对丹参酮积累的影响 | 第79-83页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第83-84页 |
| 4.5.1 讨论 | 第83页 |
| 4.5.2 小结 | 第83-84页 |
| 第五章 Smi-miR160a过表达促进丹酚酸B的积累抑制丹参酮的合成 | 第84-97页 |
| 5.1 引言 | 第84页 |
| 5.2 实验材料、仪器与试剂 | 第84-85页 |
| 5.2.1 植物材料、试剂与仪器 | 第84页 |
| 5.2.2 引物 | 第84-85页 |
| 5.3 实验方法 | 第85页 |
| 5.4 实验结果 | 第85-94页 |
| 5.4.1 miR160a靶基因分析及组织特异性表达 | 第85-88页 |
| 5.4.2 过表达miR160a转基因毛状根的获得 | 第88-89页 |
| 5.4.3 Smi-miR160a过表达促进毛状根生物量增长 | 第89-90页 |
| 5.4.4 过表达smi-miR160a基因抑制丹参酮的积累 | 第90-91页 |
| 5.4.5 Smi-miR160a基因过表达促进毛状根中酚酸的积累 | 第91页 |
| 5.4.6 Smi-miR160a基因过表达改变了丹参酮和丹酚酸生物合成途径基因的表达水平 | 第91-93页 |
| 5.4.7 Smi-miR160a基因过表达影响IAA、SA和JA的积累 | 第93-94页 |
| 5.5 讨论与小结 | 第94-97页 |
| 5.5.1 miR160a通过其靶基因ARF影响IAA积累导致丹参毛状根生物量增加 | 第94-95页 |
| 5.5.2 miR160a通过影响IAA、SA和JA导致生物量增加,丹参酮降低 | 第95-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 创新点 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-111页 |
| 附录A | 第111-122页 |
| 附录B | 第122-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 作者简历 | 第128页 |
