| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 主要符号表 | 第14-15页 |
| 第1章 引言 | 第15-26页 |
| 1.1 硫酸酯酶概述 | 第15-20页 |
| 1.1.1 硫酸酯酶简介 | 第15-16页 |
| 1.1.2 芳香基硫酸酯酶简介 | 第16页 |
| 1.1.3 芳香基硫酸酯酶基因的克隆研究概况 | 第16-17页 |
| 1.1.4 芳香基硫酸酯酶基因的表达研究概况 | 第17-18页 |
| 1.1.5 芳香基硫酸酯酶的结构分析 | 第18-19页 |
| 1.1.6 芳香基硫酸酯酶的性质及应用 | 第19-20页 |
| 1.2 海藻多糖概述 | 第20-23页 |
| 1.2.1 海藻 | 第20页 |
| 1.2.2 龙须菜 | 第20-21页 |
| 1.2.3 琼脂 | 第21-23页 |
| 1.3 酶法脱除硫酸基团 | 第23-24页 |
| 1.4 本课题研究的内容与意义 | 第24-26页 |
| 1.4.1 本课题研究的目的和意义 | 第24页 |
| 1.4.2 本课题研究的内容 | 第24-26页 |
| 第2章 芳香基硫酸酯酶的克隆及生物信息学分析 | 第26-40页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌株 | 第26页 |
| 2.1.2 质粒载体 | 第26页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.1.5 生化试剂 | 第27页 |
| 2.1.6 常用溶液及培养基配置 | 第27页 |
| 2.1.7 主要实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 E. coli DH5α、E. coli BL21 (DE3)及Pseudoalteromonas carrageenovora菌种活化及发酵培养 | 第28页 |
| 2.2.2 Pseudoalteromonas carrageenovora基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 Pseudoalteromonas carrageenovora中芳香基硫酸酯酶基因的PCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.4 Pseudoalteromonas carrageenovora中芳香基硫酸酯酶基因的测序 | 第29页 |
| 2.2.5 PCR扩增产物的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 DNA酶切反应 | 第30页 |
| 2.2.7 连接反应 | 第30页 |
| 2.2.8 E. coli DH5α、E. coli BL21 (DE3)感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.9 转化至克隆载体及筛选 | 第31页 |
| 2.2.10 重组质粒的提取 | 第31页 |
| 2.2.11 转化至表达载体及筛选 | 第31页 |
| 2.2.12 芳香基硫酸酯酶基因及其编码产物的生物学信息分析 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-39页 |
| 2.3.1 Pseudoalteromonas carrageenovora基因组DNA的提取 | 第32页 |
| 2.3.2 Pseudoalteromonas carrageenovora中芳香基硫酸酯酶基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.3 芳香基硫酸酯酶基因及其编码产物的生物信息学分析 | 第33-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 芳香基硫酸酯酶的表达和纯化及酶学性质分析 | 第40-53页 |
| 3.1 试验材料与仪器设备 | 第40-41页 |
| 3.1.1 菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 生化试剂 | 第40页 |
| 3.1.3 培养基配置 | 第40-41页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第41页 |
| 3.2 试验方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 重组蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.2.2 重组蛋白的Ni sepharose 6 Fast Flow亲和层析 | 第42页 |
| 3.2.3 重组蛋白的Sephacryl TM S-100 HR凝胶过滤层析 | 第42页 |
| 3.2.4 重组酶酶活力的测定 | 第42-43页 |
| 3.2.5 重组芳香基硫酸酯酶酶学性质分析 | 第43-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-51页 |
| 3.3.1 重组芳香基硫酸酯酶的纯化及活性验证 | 第44页 |
| 3.3.2 考马斯亮蓝法测定目的蛋白浓度 | 第44-45页 |
| 3.3.3 重组芳香基硫酸酯酶的可溶性分析 | 第45-46页 |
| 3.3.4 重组蛋白的Sephacryl TM S-100 HR凝胶过滤层析 | 第46-47页 |
| 3.3.5 对硝基苯酚 (p-NP)标准曲线 | 第47页 |
| 3.3.6 温度对酶活性及稳定性的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.7 pH对酶活性及稳定性的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.8 金属离子对酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.9 抑制剂和去垢剂对酶活性的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.10 重组芳香基硫酸酯酶动力学参数的测定 | 第51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-53页 |
| 第4章 磁性纳米粒子固定化重组芳香基硫酸酯酶及表征 | 第53-71页 |
| 4.1 试验材料与仪器设备 | 第54页 |
| 4.1.1 生化试剂 | 第54页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第54页 |
| 4.2 试验方法 | 第54-57页 |
| 4.2.1 菌株发酵培养及粗酶液的提取 | 第54-55页 |
| 4.2.2 载体的制备方法 | 第55页 |
| 4.2.3 酶固定化方法 | 第55页 |
| 4.2.4 酶活力测定方法 | 第55-56页 |
| 4.2.5 影响酶固定化过程的因素分析 | 第56页 |
| 4.2.6 固定化芳香基硫酸酯酶的物理性质表征 | 第56-57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-69页 |
| 4.3.1 交联剂戊二醛浓度对酶固定化的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.2 游离酶浓度对酶固定化的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.3 交联时间对酶固定化的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.4 固定化时间对酶固定化的影响 | 第60页 |
| 4.3.5 固定化温度对酶固定化的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.6 固定化酶的SEM表征 | 第61-62页 |
| 4.3.7 固定化酶的TEM表征 | 第62-63页 |
| 4.3.8 固定化酶的磁性能分析 | 第63-65页 |
| 4.3.9 固定化酶的FTIR分析 | 第65页 |
| 4.3.10 固定化酶的XRD分析 | 第65-66页 |
| 4.3.11 固定化酶的热重分析 | 第66-67页 |
| 4.3.12 固定化酶在水相中的稳定性分析 | 第67-68页 |
| 4.3.13 固定化酶的粒径分布 | 第68-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第5章 固定化重组芳香基硫酸酯酶酶学性质分析 | 第71-81页 |
| 5.1 试验材料与仪器设备 | 第72页 |
| 5.1.1 生化试剂 | 第72页 |
| 5.1.2 主要试验仪器 | 第72页 |
| 5.2 试验方法 | 第72-73页 |
| 5.2.1 重组芳香基硫酸酯酶粗酶液的制备 | 第72页 |
| 5.2.2 固定化重组芳香基硫酸酯酶 | 第72页 |
| 5.2.3 酶活力测定方法 | 第72页 |
| 5.2.4 试验设计方案 | 第72-73页 |
| 5.3 结果与分析 | 第73-79页 |
| 5.3.1 固定化酶的最适反应温度和温度稳定性 | 第73-74页 |
| 5.3.2 固定化酶的最适反应pH和pH稳定性 | 第74-75页 |
| 5.3.3 金属离子对固定化酶活性的影响 | 第75-76页 |
| 5.3.4 抑制剂和去垢剂对固定化酶活性的影响 | 第76-77页 |
| 5.3.5 固定化酶的动力学参数测定 | 第77-78页 |
| 5.3.6 固定化酶的操作稳定性 | 第78-79页 |
| 5.3.7 固定化酶的贮存稳定性 | 第79页 |
| 5.4 本章小结 | 第79-81页 |
| 第6章 芳香基硫酸酯酶制备龙须菜粗多糖工艺优化 | 第81-90页 |
| 6.1 试验材料与仪器设备 | 第81-82页 |
| 6.1.1 样品 | 第81页 |
| 6.1.2 菌株 | 第81页 |
| 6.1.3 生化试剂 | 第81页 |
| 6.1.4 主要实验仪器 | 第81-82页 |
| 6.2 试验方法 | 第82-83页 |
| 6.2.1 粗酶液的提取 | 第82页 |
| 6.2.2 龙须菜粗多糖的制备 | 第82页 |
| 6.2.3 酶法降解龙须菜粗多糖硫酸基团工艺优化 | 第82页 |
| 6.2.4 硫酸基含量的测定 | 第82页 |
| 6.2.5 硫酸基脱除率的计算 | 第82页 |
| 6.2.6 凝胶强度的测定 | 第82-83页 |
| 6.2.7 凝固温度的测定 | 第83页 |
| 6.2.8 融化温度的测定 | 第83页 |
| 6.2.9 水分含量的测定 | 第83页 |
| 6.2.10 粘度的测定 | 第83页 |
| 6.2.11 灰分的测定 | 第83页 |
| 6.3 结果与分析 | 第83-89页 |
| 6.3.1 不同底物浓度对酶法降解龙须菜粗多糖硫酸基团的影响 | 第83-84页 |
| 6.3.2 不同pH值对酶法降解龙须菜粗多糖硫酸基团的影响 | 第84-85页 |
| 6.3.3 不同加酶量对酶法降解龙须菜粗多糖硫酸基团的影响 | 第85-86页 |
| 6.3.4 不同温度对酶法降解龙须菜粗多糖硫酸基团的影响 | 第86-87页 |
| 6.3.5 不同振荡速率对酶法降解龙须菜粗多糖硫酸基团的影响 | 第87-88页 |
| 6.3.6 酶解产物物理性质的分析 | 第88-89页 |
| 6.4 本章小结 | 第89-90页 |
| 第7章 结论与展望 | 第90-93页 |
| 7.1 结论 | 第90-91页 |
| 7.2 展望 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-102页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第102页 |
