| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-27页 |
| 1.1 生物固氮作用 | 第13-14页 |
| 1.2 根瘤菌-豆科植物共生固氮体系形成过程 | 第14-21页 |
| 1.2.1 根瘤菌结瘤基因的研究 | 第15-19页 |
| 1.2.1.1 结瘤基因的功能 | 第17-18页 |
| 1.2.1.2 结瘤基因的表达调控 | 第18-19页 |
| 1.2.2 根瘤菌固氮基因的研究 | 第19-21页 |
| 1.3 豆科植物中根瘤菌共生信号途径 | 第21-23页 |
| 1.4 根瘤发育与类菌体分化 | 第23-25页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 材料和方法 | 第27-39页 |
| 2.1 材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 供试质粒和菌株 | 第27页 |
| 2.1.3 引物 | 第27-28页 |
| 2.1.4 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 供体菌E.coliS17-1/pMH1701的获得 | 第29-31页 |
| 2.2.1.1 E.coli质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 质粒的验证 | 第30页 |
| 2.2.1.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.2.1.4 大肠杆菌钙转化 | 第30-31页 |
| 2.2.2 苜蓿中华根瘤菌Sm2011对数期的估算及抗生素敏感性检测 | 第31页 |
| 2.2.2.1 苜蓿中华根瘤菌Sm2011对数期估算 | 第31页 |
| 2.2.2.2 苜蓿中华根瘤菌Sm2011Km抗生素敏感性检测 | 第31页 |
| 2.2.3 E.coliS17-1/pMH1701和E.coli/pRK2073对数期的估算 | 第31-32页 |
| 2.2.4 苜蓿中华根瘤菌Sm2011 Tn5-sacB突变体库的构建 | 第32-35页 |
| 2.2.4.1 三亲本杂交 | 第32页 |
| 2.2.4.2 突变体的复筛 | 第32-33页 |
| 2.2.4.3 突变体插入Tn5-sacB的PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.2.4.4 三亲本转化效率的计算 | 第33-34页 |
| 2.2.4.5 突变体库菌株的培养和保藏 | 第34-35页 |
| 2.2.4.5.1 Sm2011突变体库单个菌株的培养 | 第34页 |
| 2.2.4.5.2 Sm2011突变体库单个菌株的保藏 | 第34页 |
| 2.2.4.5.3 Sm2011混合突变体库的制备及保藏 | 第34-35页 |
| 2.2.5 盆栽接种观察共生表型 | 第35-36页 |
| 2.2.5.1 苜蓿种子的萌发 | 第35页 |
| 2.2.5.2 盆栽接种实验 | 第35-36页 |
| 2.2.6 特定目标基因突变体筛选及插入位点的鉴定 | 第36-39页 |
| 2.2.6.1 特定目标基因突变体筛选及插入位点的鉴定 | 第36-38页 |
| 2.2.6.2 目标基因F/R引物对的验证 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-58页 |
| 3.1 苜蓿中华根瘤菌Tn5-sacB转座子突变体库的构建 | 第39-43页 |
| 3.1.1 苜蓿中华根瘤菌Sm2011菌株Km抗性鉴定 | 第39页 |
| 3.1.2 三亲本杂交中供试菌株生长曲线的测定 | 第39-40页 |
| 3.1.3三亲本杂交将pMH1701质粒转入Sm2011 | 第40-41页 |
| 3.1.4 Tn5-sacB插入突变体菌株的抗性鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.5 Tn5-sacB插入突变体菌株的PCR鉴定 | 第42页 |
| 3.1.6 苜蓿中华根瘤菌Tn5-sacB插入突变体库的保藏 | 第42-43页 |
| 3.2 利用苜蓿nad1突变体筛选Sm2011突变体库 | 第43-45页 |
| 3.3 苜蓿中华根瘤菌固氮酶基因nifH突变体的筛选和表型鉴定 | 第45-49页 |
| 3.4 苜蓿中华根瘤菌结瘤基因nodC突变体的筛选和表型鉴定 | 第49-53页 |
| 3.5 苜蓿根瘤菌肽聚糖合成相关基因突变体分离及表型鉴定 | 第53-58页 |
| 4 总结、讨论与展望 | 第58-63页 |
| 4.1 总结 | 第58-59页 |
| 4.2 讨论与展望 | 第59-63页 |
| 4.2.1 抑制Mtnad1突变体共生缺陷表型的根瘤菌基因分析探讨 | 第59-60页 |
| 4.2.2 利用苜蓿根瘤菌固氮基因的功能来验证Sm2011 Tn5-sacB突变体库的有效性 | 第60页 |
| 4.2.3 苜蓿根瘤菌结瘤基因参与结瘤因子的合成 | 第60-61页 |
| 4.2.4 苜蓿根瘤菌肽聚糖基因参与类菌体发育 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 附录一 ：本研究所用的引物 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
