| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 葡萄糖氧化酶研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 葡萄糖氧化酶简介 | 第11页 |
| 1.1.2 葡萄糖氧化酶的酶学性质 | 第11页 |
| 1.1.3 葡萄糖氧化酶的来源 | 第11-13页 |
| 1.1.4 葡萄糖氧化酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4.1 葡萄糖氧化酶在食品领域中的应用 | 第13页 |
| 1.1.4.2 食品添加剂方面的应用 | 第13页 |
| 1.1.4.3 GOD在饲料行业中的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4.4 葡萄糖氧化酶的医药用途 | 第14页 |
| 1.1.4.5 葡萄糖氧化酶在纺织工业中的应用 | 第14页 |
| 1.1.5 葡萄糖氧化酶活力的测定方法 | 第14-15页 |
| 1.2 巴氏毕赤酵母表达系统 | 第15-19页 |
| 1.2.1 毕赤酵母表达宿主 | 第16页 |
| 1.2.2 表达载体(启动子、信号肽、选择标记) | 第16-18页 |
| 1.2.3 外源基因对表达的影响因素 | 第18-19页 |
| 第2章 引言 | 第19-21页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第19页 |
| 2.2 技术路线 | 第19-21页 |
| 第3章 葡萄糖氧化酶基因的优化合成及GOD重组表达载体的构建 | 第21-35页 |
| 3.1 材料和方法 | 第21-27页 |
| 3.1.1 材料及试剂 | 第21页 |
| 3.1.2 培养基和试剂配制 | 第21-22页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 3.1.4 实验方法 | 第22-27页 |
| 3.1.4.1 优化前双突变GOD基因分析 | 第22页 |
| 3.1.4.2 双突变GOD基因的优化合成 | 第22-23页 |
| 3.1.4.3 pGAPk质粒载体构建 | 第23-26页 |
| 3.1.4.4 pGAPk-h2-GOD表达载体构建 | 第26页 |
| 3.1.4.5 重组GOD表达载体功能验证 | 第26-27页 |
| 3.2 结果与分析 | 第27-35页 |
| 3.2.1 优化前的双突变GOD基因分析 | 第27-29页 |
| 3.2.2 双突变GOD基因的优化合成 | 第29-32页 |
| 3.2.3 载体构建 | 第32页 |
| 3.2.4 重组GOD表达载体功能验证 | 第32-35页 |
| 3.2.4.1 重组质粒线性化 | 第32-33页 |
| 3.2.4.2 酵母转化子筛选 | 第33-35页 |
| 第4章 GOD重组表达载体启动子的替换和改造 | 第35-47页 |
| 4.1 材料与方法 | 第35-42页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第35页 |
| 4.1.2 试剂配制 | 第35页 |
| 4.1.3 实验方法 | 第35-42页 |
| 4.2 结果与分析 | 第42-47页 |
| 4.2.1 重组表达载体pGCW14k-h2-GOD的构建 | 第42页 |
| 4.2.2 重组载体pGCW14k-h2-GOD的pGCW14启动子定点突变 | 第42-43页 |
| 4.2.3 重组载体pGCW14UAk-h2-GOD的构建 | 第43-44页 |
| 4.2.4 重组表达载体pAOX1k-h2-GOD的构建 | 第44页 |
| 4.2.5 重组表达载体pdesk-h2-GOD和pdlk-h2-GOD构建 | 第44-45页 |
| 4.2.6 pdl*k-h2-GOD构建 | 第45页 |
| 4.2.7 重组表达载体pAOXUGk-h2-GOD构建 | 第45-47页 |
| 第5章 不同启动子表达载体的功能比较 | 第47-53页 |
| 5.1 材料与方法 | 第47-48页 |
| 5.1.1 材料与试剂 | 第47页 |
| 5.1.2 试剂配制 | 第47页 |
| 5.1.3 实验方法 | 第47-48页 |
| 5.2 实验结果 | 第48-53页 |
| 5.2.1 组成型启动子功能比较 | 第48-50页 |
| 5.2.2 诱导型启动子功能比较 | 第50-51页 |
| 5.2.3 高效组成型启动子和诱导型启动子pAOX1的比较分析 | 第51-53页 |
| 第6章 讨论与展望 | 第53-57页 |
| 6.1 讨论 | 第53-54页 |
| 6.2 展望 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 在校期间发表论文和参与的科研项目 | 第65页 |
