| 中文摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 主要英文缩略词表 | 第16-18页 |
| 第一部分 | 第18-71页 |
| 第一章 TRERNA1对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响 | 第18-37页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 1 实验材料 | 第19-22页 |
| 1.1 细胞系及其载体 | 第19-20页 |
| 1.2 临床胃癌患者组织标本 | 第20页 |
| 1.3 主要试剂、耗材及仪器设备 | 第20-22页 |
| 1.3.1 试剂及耗材 | 第20-21页 |
| 1.3.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.1 细胞培养 | 第22页 |
| 2.2 胃癌患者病例组织及其培养细胞中RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.3 逆转录及Real-time PCR | 第23-24页 |
| 2.4 LncRNAs siRNA的合成及其TRERNA1过表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.5 TRERNA1干扰载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.6 转染 | 第27-28页 |
| 2.7 CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测细胞增殖能力 | 第28页 |
| 2.8 流式细胞仪检测细胞周期 | 第28-29页 |
| 2.9 细胞划痕法检测TRERNA1对细胞迁移能力的影响 | 第29页 |
| 2.10 Transwell实验检测TERNA1对细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-34页 |
| 3.1 LncRNA TRERNA1选择 | 第30-31页 |
| 3.2 LncRNA TRERNA1在胃癌细胞系及其临床病例组织中的的表达分析 | 第31-32页 |
| 3.3 LncRNA TRERNA1促进胃癌细胞的迁移和侵袭 | 第32-33页 |
| 3.4 LncRNA TRERNA1不影响肿瘤细胞的增殖和周期 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 5 小结 | 第36-37页 |
| 第二章 TRERNA1参与胃癌侵袭转移的分子机制 | 第37-54页 |
| 前言 | 第37-38页 |
| 1 实验材料 | 第38-39页 |
| 1.1 主要试剂 | 第38-39页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-45页 |
| 2.1 RNA提取、逆转录及Real-time PCR | 第39页 |
| 2.2 细胞总蛋白的提取 | 第39页 |
| 2.3 SDS-PAGE凝胶电泳及蛋白免疫印迹 | 第39-41页 |
| 2.4 胃癌细胞中TRERNA1细胞核质比分析 | 第41页 |
| 2.5 ChlP结合PCR法检测TRERNA1对CDH1启动子组蛋白H3K27me3的影响 | 第41-44页 |
| 2.6 RNA免疫沉淀(RIP)实验 | 第44页 |
| 2.7 siRNA序列及其TRERNA1邻近基因qPCR引物设计 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-51页 |
| 3.1 TRERNA1在细胞核及其细胞质的分布 | 第45页 |
| 3.2 TRERNA1是一个具有增强子样功能的lncRNA | 第45-46页 |
| 3.3 TRERNA1通过激活转录SNAI1 抑制 CDH1表达 | 第46-47页 |
| 3.4 TRERNA1对EMT分子marker的影响 | 第47-48页 |
| 3.5 TRERNA1与PRC2结合促进CDH1启动子组蛋白H3K27me3而抑制CDH1转录 | 第48-49页 |
| 3.6 TRERNA1结合DNMT3A | 第49-50页 |
| 3.7 TRERNA1抑制CDH1 mRNA的翻译 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 5 小结 | 第53-54页 |
| 第三章 TFAP-4调控TRERNA1表达的分子机制 | 第54-67页 |
| 前言 | 第54页 |
| 1 实验材料 | 第54-55页 |
| 1.1 胃癌细胞系 | 第54页 |
| 1.2 载体 | 第54页 |
| 1.3 主要试剂 | 第54-55页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-59页 |
| 2.1 TRERNA1启动子区CpG岛及其结合的转录因子预测 | 第55页 |
| 2.2 组蛋白去乙酰化抑制剂处理胃癌细胞 | 第55页 |
| 2.3 TFAP4过表达及敲低载体构建 | 第55-56页 |
| 2.4 稳定转染TFAP4-shRNA载体及pcDNA3.1-TFAP4载体 | 第56页 |
| 2.5 转录因子TFAP4对TRERNA1表达的影响 | 第56页 |
| 2.6 染色质免疫沉淀(ChIP)结合PCR法检测TFAP4结合于TRERNA1的启动子区 | 第56页 |
| 2.7 ChIP的DNA产物进行TRERNA1启动子不同位点的扩增 | 第56-57页 |
| 2.8 TRERNA1启动子区不同TFAP4结合位点截短片段荧光素酶载体的构建及活性分析 | 第57-58页 |
| 2.9 荧光素酶报告基因分析 | 第58页 |
| 2.9.1 荧光素酶报告基因转染 | 第58页 |
| 2.9.2 荧光素酶活性检测 | 第58页 |
| 2.10 TFAP4结合位点突变结合双荧光素酶活性分析TFAP4结合于TRERNA1启动子区 | 第58页 |
| 2.11 TFAP4与TRERNA1在病例中的相关性分析 | 第58-59页 |
| 3 实验结果 | 第59-64页 |
| 3.1 TRERNA1启动子CpG岛的预测及其组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对TRERNA1表达的影响 | 第59-60页 |
| 3.2 TRERNA1启动子区转录因子预测与筛选 | 第60-61页 |
| 3.3 TFAP4能够促进TRERNA1基因的转录 | 第61页 |
| 3.4 TRERNA1启动子区TFAP4结合位点的双荧光素活性分析 | 第61-62页 |
| 3.5 ChIP结合PCR法检测TFAP4结合于TRERNA1的启动子区 | 第62-63页 |
| 3.6 TRERNA1启动子E2位点突变抑制TFAP4对TRERNA1的转录活性 | 第63页 |
| 3.7 TFAP4与TRERNA1在病例中的相关性分析 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 讨论 | 第67-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 第二部分 DNMT3A功能性tagSNP rs7560488与胃癌遗传易感性关联研究 | 第71-89页 |
| 前言 | 第71-73页 |
| 1 实验材料 | 第73-74页 |
| 1.1 主要仪器和设备 | 第73页 |
| 1.2 主要试剂 | 第73-74页 |
| 1.3 研究对象 | 第74页 |
| 1.4 细胞系 | 第74页 |
| 2 实验方法 | 第74-80页 |
| 2.1 DNA提取 | 第74-75页 |
| 2.2 细胞及其组织RNA提取 | 第75页 |
| 2.3 qPCR检测目的基因相对表达量 | 第75页 |
| 2.4 DNMT3A1tagSNPs的选择及其HRM分型 | 第75-76页 |
| 2.5 双荧光素酶报告基因实验 | 第76-78页 |
| 2.6 电泳迁移变动实验(EMSA) | 第78-80页 |
| 2.7 统计分析 | 第80页 |
| 3 实验结果 | 第80-86页 |
| 3.1 研究对象的一般特征 | 第80页 |
| 3.2 遗传标记tagSNPs的选择及其基因分型 | 第80-81页 |
| 3.3 DNMT3A基因tagSNPsrs7560488与胃癌遗传易感性分析 | 第81-83页 |
| 3.4 DNMT3A基因tagSNP rs7560488不同基因型对DNMT3A1转录活性的影响 | 第83-84页 |
| 3.5 DNMT3A基因启动子rs7560488 T>C多态对转录因子AP-1结合的影响 | 第84-85页 |
| 3.6 DNMT3A rs7560488 T>C变异对DNMT3A1基因表达水平的影响 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 综述 | 第89-102页 |
| 参考文献 | 第102-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 作者简介 | 第117-118页 |
