| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-19页 |
| 1、表皮生长因子概述 | 第9-10页 |
| 2、表皮生长因子受体的概述 | 第10-13页 |
| 3、pET-28a载体介绍 | 第13-15页 |
| 4、研究思路 | 第15页 |
| 5、研究的意义和创新点 | 第15-16页 |
| 6、技术路线 | 第16-19页 |
| 第二章 实验仪器和材料 | 第19-29页 |
| 1、主要仪器 | 第19-20页 |
| 2、主要实验材料 | 第20-29页 |
| 2.1 菌株、细胞株和质粒 | 第20页 |
| 2.2 试剂 | 第20-21页 |
| 2.3 常用试剂配方 | 第21-29页 |
| 第三章 实验方法 | 第29-41页 |
| 1、构建sEGFR-pET-28a工程菌 | 第29-34页 |
| 1.1 培养菌体 | 第29页 |
| 1.2 质粒小提试剂盒抽提质粒 | 第29-30页 |
| 1.3 sEGFR基因的扩增 | 第30-31页 |
| 1.4 琼脂糖核酸电泳 | 第31页 |
| 1.5 PCR产物的胶回收 | 第31-32页 |
| 1.6 载体pET-28a和PCR产物的双酶切 | 第32-33页 |
| 1.7 双酶切片段的连接 | 第33页 |
| 1.8 CaCl_2 法转化大肠杆菌BL21(+)菌株 | 第33页 |
| 1.9 挑单克隆筛选 | 第33页 |
| 1.10 重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| 2、sEGFR-p~(ET-28a)工程菌的诱导表达 | 第34-36页 |
| 2.1 工程菌的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2 SDS-PAGE电泳检测 | 第35-36页 |
| 3、sEGFR-p~(ET-28a)工程菌诱导条件的优化 | 第36-37页 |
| 3.1 单因素优化 | 第36页 |
| 3.2 正交实验优化 | 第36-37页 |
| 4、重组表达蛋白sEGFR的纯化 | 第37-39页 |
| 4.1 提取蛋白 | 第37-38页 |
| 4.2 镍柱亲和层析纯化 | 第38页 |
| 4.3 透析 | 第38页 |
| 4.4 纯化后蛋白SDS-PAGE电泳鉴定 | 第38-39页 |
| 5、Western blot鉴定 | 第39-40页 |
| 6、CCK-8 法检测s EGFR对由EGF导致促H1648 细胞增殖的影响 | 第40-41页 |
| 第四章 实验结果 | 第41-54页 |
| 1、sEGFR基因的扩增 | 第41-42页 |
| 1.1 梯度PCR结果 | 第41页 |
| 1.2 PCR扩增s EGFR基因 | 第41-42页 |
| 2、重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| 2.1 PCR鉴定 | 第42页 |
| 2.2 双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3、sEGFR-p~(ET-28a)工程菌的诱导表达 | 第43页 |
| 4、sEGFR-p~(ET-28a)工程菌诱导条件的优化 | 第43-49页 |
| 4.1 诱导温度的优化 | 第43-44页 |
| 4.2 诱导剂IPTG浓度的优化 | 第44-45页 |
| 4.3 诱导时间的优化 | 第45-46页 |
| 4.4 诱导起始浓度的优化 | 第46-47页 |
| 4.5 正交实验优化 | 第47-49页 |
| 5、sEGFR蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 5.1 镍柱亲和层析纯化 | 第49-50页 |
| 5.2 SDS-PAGE电泳鉴定纯化结果 | 第50页 |
| 6、Western blot鉴定纯化情况 | 第50-51页 |
| 7、CCK-8 法检测s EGFR对由EGF导致促H1648 细胞增殖的影响 | 第51-52页 |
| 8、讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 结论与展望 | 第54-55页 |
| 1、结论 | 第54页 |
| 2、展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
