| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 氨肽酶概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 氨肽酶定义 | 第11页 |
| 1.1.2 氨肽酶的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.3 氨肽酶的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.4 氨肽酶的来源与生产 | 第13-14页 |
| 1.2 ccpA概述 | 第14-17页 |
| 1.2.1 ccpA简介 | 第14页 |
| 1.2.2 Cre位点的发现 | 第14-15页 |
| 1.2.3 ccpA的多效调控作用 | 第15-17页 |
| 1.3 本课题研究目的、内容和意义 | 第17-19页 |
| 1.3.1 本课题研究的目的 | 第17页 |
| 1.3.2 本课题研究的内容 | 第17-18页 |
| 1.3.3 本课题研究的意义 | 第18-19页 |
| 第二章 蜡样芽孢杆菌CZccpA基因的敲除与回补 | 第19-43页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 材料与设备 | 第19-23页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.3 主要培养基及缓冲液 | 第20-21页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.2.5 PCR引物 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.3.1 蜡样芽胞杆菌CZccpA序列鉴定 | 第23-27页 |
| 2.3.2 蜡样芽胞杆菌CZccpA基因敲除突变株的构建 | 第27-33页 |
| 2.3.3 蜡样芽胞杆菌CZccpA基因回补株的构建 | 第33-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-42页 |
| 2.4.1 ccpA基因及其上下游序列的获得 | 第34页 |
| 2.4.2 敲除质粒pKSV7-UD的构建 | 第34-37页 |
| 2.4.3 ccpA缺失突变株的构建 | 第37-40页 |
| 2.4.4 回补菌株的筛选和鉴定结果 | 第40-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 ccpA缺失对蜡样芽胞杆菌CZ氨肽酶的影响 | 第43-56页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 材料与设备 | 第43-45页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第43页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.3 主要培养基及缓冲液 | 第44-45页 |
| 3.2.4 仪器设备 | 第45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.3.1 细菌生长曲线测定 | 第45页 |
| 3.3.2 氮源浓度优化 | 第45-46页 |
| 3.3.3 碳源种类优化 | 第46页 |
| 3.3.4 碳源浓度优化 | 第46页 |
| 3.3.5 发酵时间优化 | 第46页 |
| 3.3.6 氨肽酶活检测方法 | 第46-48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-54页 |
| 3.4.1 CZ、CZ△ccpA、CZ1生长曲线的测定 | 第48页 |
| 3.4.2 氮源浓度对菌株发酵的影响 | 第48-50页 |
| 3.4.3 碳源对菌株发酵及酶活的影响 | 第50-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 ccpA缺失对蜡样芽胞杆菌CZ碳代谢的影响 | 第56-69页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 材料与设备 | 第56-59页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第56页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第56页 |
| 4.2.3 主要培养基 | 第56-57页 |
| 4.2.4 仪器设备 | 第57页 |
| 4.2.5 PCR引物 | 第57-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.3.1 RNA的提取 | 第59-60页 |
| 4.3.2 RNA反转为cDNA | 第60-61页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR | 第61页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第61-68页 |
| 4.4.1 RNA的提取及反转录 | 第61-62页 |
| 4.4.2 ccpA突变对糖酵解途径中相关基因表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.4.3 ccpA突变对三羧酸循环中相关基因表达的影响 | 第63-65页 |
| 4.4.4 ccpA突变对谷氨酸合酶表达量的影响 | 第65-68页 |
| 4.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 结论与展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附件 | 第83页 |
