| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第19-29页 |
| 1.1 引言 | 第19-20页 |
| 1.2 β-胡萝卜素概述 | 第20-21页 |
| 1.2.1 β-胡萝卜素的性质 | 第20页 |
| 1.2.2 β-胡萝卜素的生理功能 | 第20页 |
| 1.2.3 β-胡萝卜素的用途 | 第20-21页 |
| 1.3 β-胡萝卜素的生产方法 | 第21-22页 |
| 1.3.1 植物法提取β-胡萝卜素 | 第21页 |
| 1.3.2 化学法合成β-胡萝卜素 | 第21页 |
| 1.3.3 微生物发酵法生产β-胡萝卜素 | 第21-22页 |
| 1.3.4 基因工程法生产β-胡萝卜素 | 第22页 |
| 1.4 β-胡萝卜素在基因工程菌中的生物合成途径 | 第22-24页 |
| 1.5 2A体系的研究 | 第24-25页 |
| 1.6 生物法生产β-胡萝卜素的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.7 本课题研究的内容及意义 | 第26-29页 |
| 第二章 不同重组菌的发酵及发酵条件的优化 | 第29-45页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.2.1 实验菌种 | 第29页 |
| 2.2.2 培养基 | 第29-30页 |
| 2.2.3 实验仪器与试剂 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.3.1 菌种培养方法 | 第31页 |
| 2.3.2 不同碳源对重组菌InvSC1-3生长及β-胡萝卜素产量的影响 | 第31-32页 |
| 2.3.3 菌体生物量的测定 | 第32页 |
| 2.3.4 不同效应物对InvSC1-1的生长及β-胡萝卜素产量的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.5 β-胡萝卜素的提取及含量的测定 | 第33-34页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第34-42页 |
| 2.4.1 InvSC1-1的生长曲线及β-胡萝卜素的产量变化 | 第34-35页 |
| 2.4.2 InvSC1-2的生长曲线及β-胡萝卜素的产量变化 | 第35-36页 |
| 2.4.3 InvSC1-3的生长曲线及β-胡萝卜素的产量变化 | 第36-38页 |
| 2.4.4 不同碳源对重组菌InvSC1-3生长及β-胡萝卜素产量的影响 | 第38-40页 |
| 2.4.5 β-紫罗酮对InvSC1-1产β-胡萝卜素的影响 | 第40页 |
| 2.4.6 不同浓度的效应物对InvSC1-1菌体干重的影响 | 第40-41页 |
| 2.4.7 不同浓度效应物对β-胡萝卜素产量的影响 | 第41-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-45页 |
| 第三章 β-胡萝卜素生物合成途径的克隆与表达 | 第45-75页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-48页 |
| 3.2.1 菌种及载体 | 第45页 |
| 3.2.2 培养基及缓冲液 | 第45-46页 |
| 3.2.3 实验仪器与试剂 | 第46-48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-60页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第48-49页 |
| 3.3.2 质粒提取 | 第49页 |
| 3.3.3 PCR反应 | 第49-50页 |
| 3.3.4 质粒验证PCR反应 | 第50-51页 |
| 3.3.5 DNA柱回收 | 第51页 |
| 3.3.6 胶回收 | 第51-52页 |
| 3.3.7 酶切反应 | 第52页 |
| 3.3.8 连接反应 | 第52-53页 |
| 3.3.9 大肠杆菌化学转化 | 第53页 |
| 3.3.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第53页 |
| 3.3.11 β-胡萝卜素合成基因模块的构建方法 | 第53-55页 |
| 3.3.12 不同来源基因的重组菌的构建 | 第55-57页 |
| 3.3.13 酿酒酵母转化 | 第57-58页 |
| 3.3.14 酵母菌液PCR | 第58页 |
| 3.3.15 酵母质粒提取 | 第58-59页 |
| 3.3.16 菌种培养方法 | 第59页 |
| 3.3.17 β-胡萝卜素的提取及含量的测定 | 第59-60页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第60-73页 |
| 3.4.1 β-胡萝卜素合成基因模块的构建及表达 | 第60-67页 |
| 3.4.2 不同来源基因重组菌的构建及表达 | 第67-73页 |
| 3.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 第四章 限速酶基因的筛选 | 第75-93页 |
| 4.1 引言 | 第75页 |
| 4.2 实验材料 | 第75-76页 |
| 4.2.1 菌种及载体 | 第75页 |
| 4.2.2 培养基及缓冲液 | 第75-76页 |
| 4.2.3 实验仪器与试剂 | 第76页 |
| 4.3 实验方法 | 第76-81页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第76-77页 |
| 4.3.2 质粒提取 | 第77页 |
| 4.3.3 PCR反应 | 第77页 |
| 4.3.4 质粒验证PCR反应 | 第77页 |
| 4.3.5 DNA柱回收 | 第77页 |
| 4.3.6 胶回收 | 第77页 |
| 4.3.7 酶切反应 | 第77页 |
| 4.3.8 连接反应 | 第77页 |
| 4.3.9 大肠杆菌化学转化 | 第77-78页 |
| 4.3.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第78页 |
| 4.3.11 酵母基因组提取 | 第78页 |
| 4.3.12 重组质粒的构建 | 第78-80页 |
| 4.3.13 重组菌的构建 | 第80页 |
| 4.3.14 菌种培养方法 | 第80-81页 |
| 4.3.15 β-胡萝卜素的提取及含量的测定 | 第81页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第81-91页 |
| 4.4.1 重组质粒pRS425-carRA、pRS425-carB、pRS425-fps、pRS425-carRA-carB的构建 | 第81-84页 |
| 4.4.2 重组质粒pRS425-erg8-erg19、pRS425-erg12-idi的构建 | 第84-89页 |
| 4.4.3 重组菌发酵产β-胡萝卜素 | 第89-91页 |
| 4.5 本章小结 | 第91-93页 |
| 第五章 利用2A体系构建β-胡萝卜素生物合成途径 | 第93-105页 |
| 5.1 引言 | 第93页 |
| 5.2 实验材料 | 第93页 |
| 5.2.1 菌种及载体 | 第93页 |
| 5.2.2 培养基及缓冲液 | 第93页 |
| 5.2.3 实验仪器与试剂 | 第93页 |
| 5.3 实验方法 | 第93-97页 |
| 5.3.1 引物设计 | 第94页 |
| 5.3.2 质粒提取 | 第94页 |
| 5.3.3 PCR反应 | 第94-95页 |
| 5.3.4 质粒验证PCR反应 | 第95页 |
| 5.3.5 DNA柱回收 | 第95页 |
| 5.3.6 胶回收 | 第95页 |
| 5.3.7 酶切反应 | 第95页 |
| 5.3.8 连接反应 | 第95页 |
| 5.3.9 大肠杆菌化学转化 | 第95页 |
| 5.3.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第95页 |
| 5.3.11 重组质粒的构建 | 第95-96页 |
| 5.3.12 重组菌的构建 | 第96-97页 |
| 5.3.13 菌种培养方法 | 第97页 |
| 5.3.14 β-胡萝卜素的提取及含量的测定 | 第97页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第97-103页 |
| 5.4.1 含有2A序列的目的基因片段的扩增 | 第97页 |
| 5.4.2 重组质粒2A-pAB、2A-pIY的构建 | 第97-99页 |
| 5.4.3 重组质粒2A-pGAB、2A-pIYBE的构建 | 第99-102页 |
| 5.4.4 重组菌发酵产β-胡萝卜素 | 第102-103页 |
| 5.5 本章小结 | 第103-105页 |
| 第六章 结论与展望 | 第105-109页 |
| 6.1 结论 | 第105-107页 |
| 6.2 展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-115页 |
| 附录 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 作者和导师简介 | 第119-120页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第120-121页 |
