致谢 | 第6-7页 |
摘要 | 第7-10页 |
abstract | 第10-13页 |
英文缩略词 | 第19-20页 |
第一章 文献综述 | 第20-38页 |
1.1 植物免疫系统简述 | 第20-21页 |
1.2 植物NLR基因的研究进展 | 第21-28页 |
1.2.1 植物NLR蛋白的生物学功能及序列特征 | 第22-23页 |
1.2.2 NLR蛋白各结构域的功能 | 第23-28页 |
1.2.2.1 NLR蛋白N端的功能 | 第23-25页 |
1.2.2.2 NB-ARC结构域的功能 | 第25-26页 |
1.2.2.3 LRR结构域的功能 | 第26-28页 |
1.3 NLR蛋白的识别模式 | 第28-29页 |
1.4 NLR蛋白激活模式 | 第29-32页 |
1.5 NLR蛋白的亚细胞分布特性 | 第32-34页 |
1.6 NLR蛋白的其它生理生化功能 | 第34-35页 |
1.7 植物花发育研究 | 第35-37页 |
1.8 项目的研究意义 | 第37-38页 |
第二章 材料与方法 | 第38-47页 |
2.1 材料 | 第38-39页 |
2.1.1 植物材料 | 第38页 |
2.1.2 菌株和质粒 | 第38页 |
2.1.3 主要酶和试剂 | 第38页 |
2.1.4 主要培养基和溶液 | 第38-39页 |
2.2 方法 | 第39-47页 |
2.2.1 植物材料种植 | 第39页 |
2.2.2 RNA提取 | 第39页 |
2.2.3 cDNA合成 | 第39-40页 |
2.2.4 OsLSR的克隆及相关载体构建 | 第40-43页 |
2.2.5 实时荧光定量PCR | 第43页 |
2.2.6 农杆菌介导的烟草瞬时表达 | 第43-44页 |
2.2.7 GUS组织化学染色 | 第44页 |
2.2.8 H_2O_2 DAB染色 | 第44页 |
2.2.9 农杆菌介导的水稻愈伤遗传转化 | 第44-45页 |
2.2.10 酵母转化 | 第45-47页 |
第三章 OsLSR表达上调激活水稻免疫应答导致生长弱势 | 第47-58页 |
3.1 转Bt基因低结实率插入突变体T51-1的发现和表型鉴定 | 第47-48页 |
3.1.1 T51-1的突变体来源 | 第47页 |
3.1.2 T51-1的表型特征 | 第47-48页 |
3.2 外源Bt基因插入位点确认及OsLSR基因克隆 | 第48-52页 |
3.2.1 OsLSR编码一个CC-NB-LRR抗病蛋白 | 第49-50页 |
3.2.3 OsLSR N端氨基酸序列分析 | 第50-52页 |
3.3 OsLSR表达上调激活水稻免疫应答导致生长弱势 | 第52-54页 |
3.3.1 外源Bt基因插入导致OsLSR在T51-1叶片中表达上调 | 第52-53页 |
3.3.2 OsLSR表达上调激活了T51-1的免疫应答导致弱势 | 第53-54页 |
3.4 OsLSR的过表达研究 | 第54-56页 |
3.5 讨论 | 第56-58页 |
第四章 RNAi干扰OsLSR导致水稻小花分化异常 | 第58-67页 |
4.1 OsLSR的时空表达模式 | 第58-61页 |
4.1.1 OsLSR在水稻各个组织中的表达分析 | 第58-59页 |
4.1.2 OsLSR启动子驱动的GUS报告基因的表达特性 | 第59-61页 |
4.2 通过RNA干扰的OsLSR基因沉默的研究 | 第61-65页 |
4.2.1 OsLSR基因沉默对水稻生长发育的影响 | 第61-65页 |
4.2.1.1 OsLSR基因沉默导致转基因水稻根发育异常 | 第61-62页 |
4.2.1.2 OsLSR基因沉默导致水稻花器官分化紊乱 | 第62-65页 |
4.3 讨论 | 第65-67页 |
第五章 OsLSR的亚细胞定位研究 | 第67-77页 |
5.1 瞬时表达OsLSR的eGFP融合蛋白诱导烟草叶片HR | 第67-68页 |
5.2 OsLSR三个功能域荧光融合蛋白的亚细胞分布特点 | 第68-74页 |
5.2.1 OsLSR蛋白N端的亚细胞分布特性 | 第69-71页 |
5.2.2 OsLSR蛋白NB功能域eGFP融合蛋白表现为核质共分布 | 第71页 |
5.2.3 OsLSR蛋白C端的亚细胞分布特性 | 第71-74页 |
5.3 讨论 | 第74-77页 |
第六章 过表达OsLSR各个功能域对水稻育性和花分化的影响 | 第77-90页 |
6.1 过量表达OsLSR的单独功能域或片段显著降低育性 | 第78页 |
6.2 过量表达OsLSR的功能域或片段影响水稻小花分化 | 第78-82页 |
6.3 过量表达OsLSR的功能域或片段对内源OsLSR转录水平的影响 | 第82-83页 |
6.4 OsLSR分子内互作研究 | 第83-87页 |
6.4.1 LSR1-178和LSR428-894在酵母中互作 | 第84-85页 |
6.4.2 LSR428-546负责了与完整LSR1-178的互作 | 第85-86页 |
6.4.3 LSR1-178在酵母中能形成二聚体并与完整OsLSR蛋白互作 | 第86-87页 |
6.5 讨论 | 第87-90页 |
第七章 融合外源信号肽对OsLSR功能的影响 | 第90-100页 |
7.1 外源信号肽改变了LSRl-178::eGFP的亚细胞分布 | 第90-91页 |
7.2 外源信号肽对OsLSR诱导烟草叶片HR及水稻免疫应答的影响 | 第91-94页 |
7.3 过量表达LSR::eGFP~(NES)和LSR::eGFP~(NLS)对水稻育性及小花分化的影响 | 第94-96页 |
7.4 过量表达LSR::eGFP~(NES)和LSR::eGFP~(NLS)对水稻内源OsLSR转录水平的影响 | 第96-98页 |
7.5 讨论 | 第98-100页 |
第八章 OsLSR1-178与OsSO和OsMT2b在酵母中存在互作 | 第100-108页 |
8.1 LSR1-178在酵母中与OsSO和OsMT2b存在互作 | 第100-102页 |
8.2 OsLSR对OsSO和OsMT2b的表达具有负调控作用 | 第102页 |
8.3 过量表达OsLSR的功能域对OsSO和OsMT2b转录水平的影响 | 第102-104页 |
8.4 OsLSR对OsSO和OsMT2b转录负调控的信号主要来源于细胞质 | 第104-105页 |
8.5 讨论 | 第105-108页 |
全文总结 | 第108-112页 |
参考文献 | 第112-125页 |
附录 | 第125-136页 |
附录1 实验中用到的植物表达载体结构示意图 | 第125-127页 |
附录2 实验中用于载体构建和实时荧光定量PCR所用引物信息 | 第127-130页 |
附录3 OsLSR,OsSO,OsMT2b的mRNA序列信息 | 第130-133页 |
附录4 实验中用到的培养基配方 | 第133-136页 |