常用缩略词表 | 第5-6页 |
致谢 | 第6-7页 |
前言 | 第7-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
目录 | 第13-17页 |
第一章 绪论 | 第17-23页 |
1 卤虫的特征和生态习性 | 第17页 |
2 卤虫的生活史 | 第17-18页 |
3 卤虫休眠卵的抗逆机制 | 第18-20页 |
3.1 海藻糖 | 第19页 |
3.2 p26 | 第19页 |
3.3 Artemin | 第19-20页 |
4 休眠卵壳的结构 | 第20-21页 |
5 几丁质和几丁质结合蛋白的特点 | 第21-22页 |
6 展望 | 第22-23页 |
第二章 Arp-CBPs的获得和表达特征分析 | 第23-45页 |
摘要 | 第23页 |
1 引言 | 第23-24页 |
2 材料和仪器 | 第24-25页 |
2.1 实验材料 | 第24页 |
2.2 实验试剂 | 第24-25页 |
2.3 实验仪器 | 第25页 |
3 实验方法 | 第25-33页 |
3.1 卤虫养殖 | 第25-26页 |
3.2 获取Arp-CBPs序列及分析 | 第26-27页 |
3.3 Real-time RT-PCR方法对Arp-CBPs基因表达特征分析 | 第27-28页 |
3.4 原位杂交方法检测Arp-CBPs基因的表达部位 | 第28-33页 |
3.4.1 制备原位杂交的探针 | 第28-30页 |
3.4.2 冷冻切片的制备 | 第30-31页 |
3.4.3 原位杂交 | 第31-33页 |
4 实验结果 | 第33-43页 |
4.1 Arp-CBPs基因和蛋白序列分析 | 第33-37页 |
4.2 Arp-CBPs的氨基酸序列比对和CBDs分析 | 第37-39页 |
4.3 Arp-CBPs的mRNA在不同生殖卤虫中的表达差异 | 第39-40页 |
4.4 Arp-CBPs的mRNA在卤虫休眠卵形成过程中的表达特征 | 第40-42页 |
4.5 Arp-CBPs是在卤虫休眠卵的胚胎细胞中表达 | 第42-43页 |
5 讨论 | 第43-45页 |
第三章 Arp-CBPs的蛋白表达特征和定位 | 第45-55页 |
摘要 | 第45页 |
1 引言 | 第45-46页 |
2 材料和仪器 | 第46页 |
2.1 实验材料 | 第46页 |
2.2 实验试剂 | 第46页 |
2.3 实验仪器 | 第46页 |
3 实验方法 | 第46-50页 |
3.1 样品总蛋白质的抽提 | 第46-47页 |
3.2 Arp-CBPs的抗体制备 | 第47-48页 |
3.3 Western blotting检测Arp-CBPs的表达特征 | 第48-49页 |
3.4 胶体金偶联免疫组化 | 第49-50页 |
3.4.1 冷冻切片的制备 | 第49页 |
3.4.2 胶体金偶联的免疫组化 | 第49-50页 |
4 实验结果 | 第50-53页 |
4.1 Arp-CBPs在卤虫休眠卵形成过程中的表达特征 | 第50-51页 |
4.2 Arp-CBPs在卤虫休眠卵壳上的分布 | 第51-53页 |
5 讨论 | 第53-55页 |
第四章 Arp-CBPs的功能研究 | 第55-67页 |
摘要 | 第55页 |
1 引言 | 第55-56页 |
2 材料与仪器 | 第56-57页 |
2.1 实验材料 | 第56页 |
2.2 实验试剂 | 第56页 |
2.3 实验仪器 | 第56-57页 |
3 实验方法 | 第57-60页 |
3.1 dsRNA的制备及干涉 | 第57-58页 |
3.1.1 制备dsRNA | 第57-58页 |
3.1.2 dsRNA注射和培养 | 第58页 |
3.2 干涉效率检测 | 第58-59页 |
3.2.1 Real-time PCR检测mRNA干涉效率 | 第58-59页 |
3.2.2 Western blotting分析蛋白的干涉结果 | 第59页 |
3.3 透射电子显微镜下观察干涉现象 | 第59页 |
3.4 体外检测Arp-CBPs蛋白的糖结合活性 | 第59-60页 |
4 实验结果 | 第60-65页 |
4.1 干涉效率的检测 | 第60-62页 |
4.2 干涉结果观察 | 第62-64页 |
4.3 Arp-CBPs蛋白的糖结合活性 | 第64-65页 |
5 讨论 | 第65-67页 |
结论 | 第67-69页 |
参考文献 | 第69-75页 |
附录一 常用试剂配制一览表 | 第75-83页 |
1 分子克隆常用试剂 | 第75页 |
2 感受态细胞制备常用试剂 | 第75-76页 |
3 核酸电泳常用试剂 | 第76页 |
4 Northern blotting分析常用试剂 | 第76-78页 |
5 Western blotting常用试剂 | 第78-79页 |
6 原位杂交常用试剂 | 第79-81页 |
7 质粒提取试剂 | 第81页 |
8 蛋白抽提和纯化试剂 | 第81-82页 |
9 体外结合的试剂 | 第82-83页 |
附录二 引物清单 | 第83-84页 |
附录三 作者简介 | 第84页 |