| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 miRNA研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第11页 |
| 1.1.2 miRNA的生成及作用机制 | 第11-12页 |
| 1.1.3 miRNA靶基因预测与验证方法研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 C2C12细胞的成肌分化研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 C2C12细胞 | 第14页 |
| 1.2.2 骨骼肌形成过程 | 第14页 |
| 1.2.3 参与肌细胞分化的主要调控因子 | 第14-15页 |
| 1.2.4 MiRNA对肌肉发育的调节 | 第15-18页 |
| 1.3 转录组测序(RNA-seq) | 第18-20页 |
| 1.3.1 RNA-Seq研究原理 | 第18页 |
| 1.3.2 RNA测序技术的应用 | 第18-20页 |
| 1.4 MiR-204-5p的研究进展 | 第20-22页 |
| 2 本试验的目的意义与研究内容 | 第22-23页 |
| 3 材料和方法 | 第23-34页 |
| 3.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 3.1.1 试验细胞 | 第23页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第23页 |
| 3.1.3 主要药品试剂及培养液配方 | 第23-24页 |
| 3.2 试验方法 | 第24-34页 |
| 3.2.1 C2C12细胞的复苏、培养与生长曲线绘制 | 第24页 |
| 3.2.2 C2C12细胞的诱导分化 | 第24-25页 |
| 3.2.3 miR-204-5p对C2C12细胞成肌分化的影响 | 第25-26页 |
| 3.2.4 miR-204-5p不同处理组间转录组比较分析及靶标筛选 | 第26-34页 |
| 3.2.4.1 总RNA的提取、质检及RNA pool的构建 | 第26页 |
| 3.2.4.2 测序文库的构建与测序 | 第26-31页 |
| 3.2.4.3 RNA-seq测序数据分析 | 第31-32页 |
| 3.2.4.4 miR-204-5p靶标预测与判定 | 第32页 |
| 3.2.4.5 RNA-seq数据可靠性验证与miR-204-5p预测靶基因验证 | 第32-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-61页 |
| 4.1 C2C12细胞的培养与生长曲线绘制 | 第34-35页 |
| 4.2 C2C12细胞诱导成肌分化过程中肌管的形态变化观察结果 | 第35页 |
| 4.3 miR-204-5p不同处理对肌管形成的免疫荧光染色结果 | 第35-37页 |
| 4.4 miR-204-5p不同处理组间转录组特征分析 | 第37-43页 |
| 4.4.1 miR-204-5p不同处理组总RNA质检结果 | 第37页 |
| 4.4.2 基因组mapping结果 | 第37-39页 |
| 4.4.3 基因表达丰度及功能注释 | 第39-43页 |
| 4.5 不同处理组间转录组差异分析与miR-204-5p的靶标基因筛选 | 第43-58页 |
| 4.5.1 三组处理细胞间差异转录本鉴定 | 第43-49页 |
| 4.5.2 三组处理细胞间差异转录本功能分析 | 第49-54页 |
| 4.5.3 miR-204-5p的靶标基因筛选与生物信息学验证 | 第54-58页 |
| 4.6 QPCR结果 | 第58-61页 |
| 5 讨论 | 第61-67页 |
| 5.1 C2C12细胞的培养与诱导分化时机的选择 | 第61页 |
| 5.2 miR-204-5p的转染方式的选择与确定 | 第61-62页 |
| 5.3 miR-204-5p的类似物与抑制剂的选择 | 第62页 |
| 5.4 转录组分析方法的选择 | 第62-63页 |
| 5.5 文库构建中合并生物学重复的问题 | 第63页 |
| 5.6 RNA-seq结果的可靠性 | 第63-64页 |
| 5.7 靶标基因与成肌分化的关联 | 第64-67页 |
| 5.7.1 成肌增强因子Mef2c | 第64-65页 |
| 5.7.2 低密度脂蛋白受体相关蛋白4 | 第65页 |
| 5.7.3 Clq肿瘤坏死因子相关蛋白3 | 第65页 |
| 5.7.4 PDZ与LIM结构域蛋白3 | 第65-66页 |
| 5.7.5 脑信号蛋白3C | 第66页 |
| 5.7.6 骨诱导因子OGN | 第66-67页 |
| 6 结论 | 第67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
