| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 1 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 研究背景 | 第14-24页 |
| 1.1.1 植物对非生物胁迫的应答机制 | 第14-15页 |
| 1.1.2 不依赖于 ABA 的信号转导途径 | 第15-16页 |
| 1.1.3 依赖于 ABA 的信号转导途径 | 第16-22页 |
| 1.1.4 ABF 转录因子研究现状 | 第22-24页 |
| 1.2 研究目的及主要研究内容 | 第24-26页 |
| 1.2.1 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.2.2 研究内容 | 第25页 |
| 1.2.3 技术路线 | 第25-26页 |
| 2 烟草 NtABF1 和 NtABF2 基因的克隆与生物信息学分析 | 第26-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 载体及菌种 | 第26页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| 2.1.5 主要试剂及缓冲液配方 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第28-32页 |
| 2.2.1 烟草 ABF 转录因子基因序列的同源检索 | 第28页 |
| 2.2.2 烟草总 RNA 提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 核酸浓度及质量检测 | 第29页 |
| 2.2.4 反转录合成 cDNA 第一链 | 第29-30页 |
| 2.2.5 目的基因的 PCR 扩增 | 第30页 |
| 2.2.6 目的基因的回收 | 第30页 |
| 2.2.7 目的基因的连接及转化 | 第30-31页 |
| 2.2.8 重组质粒的 PCR 鉴定与测序 | 第31页 |
| 2.2.9 目的基因生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第32-41页 |
| 2.3.1 烟草总 RNA 的提取检测 | 第32页 |
| 2.3.2 烟草 ABF 转录因子编码区的分子克隆与序列分析 | 第32-33页 |
| 2.3.3 烟草 NtABF1 和 NtABF2 转录因子理化性质分析 | 第33-35页 |
| 2.3.4 烟草 NtABF1 和 NtABF2 的功能结构域和二、三级结构预测 | 第35-36页 |
| 2.3.5 烟草 NtABF1 和 NtABF2 的信号肽及跨膜区预测 | 第36-37页 |
| 2.3.6 烟草 NtABF1 和 NtABF2 多序列比对和进化分析 | 第37-40页 |
| 2.3.7 烟草 NtABF1 和 NtABF2 的亚细胞定位及磷酸化位点预测 | 第40-41页 |
| 2.3.8 烟草 NtABF1 和 NtABF2 功能预测 | 第41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-44页 |
| 3 烟草 NtABF1 和 NtABF2 基因表达模式分析 | 第44-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第44页 |
| 3.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第44页 |
| 3.1.4 主要试剂及缓冲液配方 | 第44页 |
| 3.2 实验方法与步骤 | 第44-47页 |
| 3.2.1 组织表达分析取材 | 第44页 |
| 3.2.2 逆境胁迫处理 | 第44-45页 |
| 3.2.3 荧光定量 PCR 检测 | 第45-47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 3.3.1 烟草 NtABF1 和 NtABF2 基因组织表达模式分析 | 第47页 |
| 3.3.2 烟草 NtABF1 和 NtABF2 基因逆境胁迫表达模式分析 | 第47-50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 4 烟草 NtABF1 和 NtABF2 蛋白与 ABRE 元件体外结合能力分析 | 第52-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-54页 |
| 4.1.1 载体及菌种 | 第52页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第52页 |
| 4.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第52-53页 |
| 4.1.4 主要试剂及缓冲液配方 | 第53-54页 |
| 4.2 试验方法与步骤 | 第54-62页 |
| 4.2.1 目的基因原核表达载体构建 | 第54-56页 |
| 4.2.2 目的蛋白诱导条件摸索 | 第56-58页 |
| 4.2.3 目的蛋白大量诱导表达 | 第58-59页 |
| 4.2.4 过柱纯化目的蛋白 | 第59-60页 |
| 4.2.5 目的蛋白与 ABRE 元件体外结合能力分析 | 第60-62页 |
| 4.3 结果与分析 | 第62-69页 |
| 4.3.1 烟草 NtABF1 和 NtABF2 基因原核表达载体构建 | 第62-64页 |
| 4.3.2 烟草 NtABF1 和 NtABF2 蛋白诱导表达 | 第64-65页 |
| 4.3.3 烟草 NtABF1 和 NtABF2 蛋白纯化 | 第65-68页 |
| 4.3.4 烟草 NtABF1 和 NtABF2 蛋白与 ABRE 元件体外结合分析 | 第68-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69-72页 |
| 5 烟草 NtABF1 和 NtABF2 过表达转基因株系的获得及功能鉴定 | 第72-84页 |
| 5.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第72页 |
| 5.1.2 载体及菌种 | 第72页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第72页 |
| 5.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第72页 |
| 5.1.5 主要试剂及缓冲液配方 | 第72-73页 |
| 5.2 实验方法与步骤 | 第73-77页 |
| 5.2.1 目的基因植物过表达载体构建 | 第73-74页 |
| 5.2.2 农杆菌化学感受态的制备 | 第74-75页 |
| 5.2.3 重组表达载体转化农杆菌 LBA4404 | 第75页 |
| 5.2.4 农杆菌阳性转化子的筛选 | 第75页 |
| 5.2.5 目的基因遗传转化体系构建 | 第75-76页 |
| 5.2.6 阳性转基因植株的分子筛选 | 第76-77页 |
| 5.2.7 T0代阳性转基因株系抗逆性分析 | 第77页 |
| 5.3 结果与分析 | 第77-83页 |
| 5.3.1 烟草 NtABF1 和 NtABF2 基因植物过表达载体构建 | 第77-79页 |
| 5.3.2 农杆菌阳性转化子的筛选 | 第79-80页 |
| 5.3.3 阳性转基因株系的筛选 | 第80-82页 |
| 5.3.4 T0代转基因株系抗逆性评价 | 第82-83页 |
| 5.4 本章小结 | 第83-84页 |
| 6 结论与展望 | 第84-86页 |
| 6.1 主要结论 | 第84-85页 |
| 6.2 本研究创新点 | 第85页 |
| 6.3 后续研究工作 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 附录 | 第94页 |
| A. 作者在攻读硕士学位期间整理的论文 | 第94页 |
| B. 作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第94页 |
