| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文縮略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-25页 |
| 1.1 植物与植食性昆虫之间的协同进化关系 | 第14-16页 |
| 1.1.1 植食性昆虫取食诱导植物防御反应 | 第14-15页 |
| 1.1.2 植食性昆虫反防御 | 第15-16页 |
| 1.1.2.1 激发子压制植物防御反应 | 第15-16页 |
| 1.1.2.2 其它反防御机制 | 第16页 |
| 1.2 植食性昆虫口腔分泌物中的激发子 | 第16-22页 |
| 1.2.1 咀嚼式口器的激发子种类及功能 | 第17-20页 |
| 1.2.1.1 鳞翅目 | 第17-19页 |
| 1.2.1.2 直翅目 | 第19-20页 |
| 1.2.2 刺吸式口器昆虫唾液激发子种类及功能 | 第20页 |
| 1.2.2.1 刺吸式口器昆虫唾液激发子 | 第20页 |
| 1.2.2.2 刺吸式口器昆虫唾液潜在激发子 | 第20页 |
| 1.2.3 植食性昆虫唾液激发子的分子生物学研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2.4 产卵激发子 | 第21-22页 |
| 1.3 RNAi在昆虫领域的应用及进展 | 第22页 |
| 1.4 结语及展望 | 第22-23页 |
| 1.5 研究目的、意义和研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 茶尺蠖幼虫相关唾液蛋白编码基因EoGX和EoGL的克隆和组织表达分析 | 第25-54页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第25页 |
| 2.1.2 供试试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 供试材料 | 第26页 |
| 2.1.4 茶尺蠖幼虫唾液腺Total RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.1.5 cDNA第一链的合成 | 第27页 |
| 2.1.6 LB培养基的制备 | 第27页 |
| 2.1.7 DNA的凝胶回收 | 第27-28页 |
| 2.1.8 制备感受态细胞 | 第28页 |
| 2.1.9 连接T载体 | 第28页 |
| 2.1.10 大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| 2.1.11 菌落PCR | 第28-29页 |
| 2.1.12 EoGX和EoGL基因部分序列的验证 | 第29-32页 |
| 2.1.12.1 引物设计 | 第29页 |
| 2.1.12.2 反转录 | 第29页 |
| 2.1.12.3 PCR扩增 | 第29-32页 |
| 2.1.13 EoGX和EoGL基因5'RACE扩增 | 第32-37页 |
| 2.1.13.1 引物设计 | 第32-33页 |
| 2.1.13.2 EoGX和EoGL基因5'RACE前处理和反转录 | 第33-34页 |
| 2.1.13.3 PCR扩增 | 第34-37页 |
| 2.1.14 EoGX和EoGL基因3'RACE扩增 | 第37-39页 |
| 2.1.14.1 引物设计 | 第37页 |
| 2.1.14.2 PCR扩增 | 第37-39页 |
| 2.1.15 EoGX和EoGL序列的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 2.1.16 EoGX和EoGL基因组织表达分析 | 第40-41页 |
| 2.1.16.1 引物设计 | 第40页 |
| 2.1.16.2 实时荧光定量PCR法 | 第40页 |
| 2.1.16.3 实时荧光定量PCR反应效率的确定与表达量的计算 | 第40-41页 |
| 2.1.17 数据分析方法 | 第41页 |
| 2.2 结果与分析 | 第41-52页 |
| 2.2.1 茶尺蠖幼虫唾液腺Total RNA提取 | 第41-42页 |
| 2.2.2 EoGX和EoGL部分序列验证 | 第42页 |
| 2.2.3 EoGX和EoGL基因3'RACE扩增 | 第42-43页 |
| 2.2.4 EoGX和EoGL基因5'RACE扩增 | 第43页 |
| 2.2.5 EoGX和EoGL基因ORF序列分析 | 第43-46页 |
| 2.2.6 EoGX和EoGL氨基酸序列生物信息学分析 | 第46-48页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR反应条件的确定 | 第48页 |
| 2.2.8 EoGX和EoGL组织表达分析 | 第48-52页 |
| 2.3 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 EoGX和EoGL基因的原核表达 | 第54-67页 |
| 3.1 材料与方法 | 第54-60页 |
| 3.1.1 仪器设备 | 第54页 |
| 3.1.2 供试材料 | 第54页 |
| 3.1.3 cDNA第一链的合成 | 第54-55页 |
| 3.1.4 加A反应 | 第55页 |
| 3.1.5 PCR产物纯化 | 第55页 |
| 3.1.6 连接T载体 | 第55页 |
| 3.1.7 转化大肠杆菌 | 第55页 |
| 3.1.8 菌落PCR | 第55页 |
| 3.1.9 质粒的提取 | 第55-56页 |
| 3.1.10 EoGX原核表达重组质粒的构建及诱导表达 | 第56-58页 |
| 3.1.10.1 引物设计 | 第56页 |
| 3.1.10.2 PCR扩增 | 第56-58页 |
| 3.1.11 试剂配制 | 第58-59页 |
| 3.1.12 EoGX/pCold I和EoGL/pET28a(+)重组质粒的表达 | 第59页 |
| 3.1.13 SDS-PAGE凝胶电泳检测 | 第59页 |
| 3.1.14 Western blotting | 第59-60页 |
| 3.2 结果与分析 | 第60-66页 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建和鉴定 | 第60-63页 |
| 3.2.1.1 EoGX原核表达载体的构建和鉴定 | 第60-61页 |
| 3.2.1.2 EoGL原核表达载体的构建和鉴定 | 第61-63页 |
| 3.2.2 重组序列比对 | 第63-65页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第65-66页 |
| 3.2.4 Western blotting | 第66页 |
| 3.3 讨论 | 第66-67页 |
| 第四章 沉默茶尺蠖相关基因的RNAi技术建立 | 第67-76页 |
| 4.1 材料与方法 | 第67-70页 |
| 4.1.1 供试材料 | 第67页 |
| 4.1.2 总RNA提取 | 第67页 |
| 4.1.3 cDNA第一链的合成 | 第67页 |
| 4.1.4 PCR扩增 | 第67-69页 |
| 4.1.4.1 引物设计 | 第68页 |
| 4.1.4.2 PCR扩增 | 第68-69页 |
| 4.1.5 dsRNA的体外转录合成 | 第69页 |
| 4.1.5.1 合成双链RNA | 第69页 |
| 4.1.5.2 dsRNA纯化 | 第69页 |
| 4.1.6 饲喂及注射试虫 | 第69-70页 |
| 4.1.7 生长发育速率调查 | 第70页 |
| 4.1.8 试虫目标基因表达的RT-PCR检测 | 第70页 |
| 4.1.8.1 引物设计 | 第70页 |
| 4.1.8.2 荧光定量RT-PCR | 第70页 |
| 4.1.9 数据分析方法 | 第70页 |
| 4.2 结果与分析 | 第70-74页 |
| 4.2.1 饲喂法对试虫生长发育速率及死亡率调查 | 第70-71页 |
| 4.2.2 注射后试虫生长发育速率及死亡率调查 | 第71-72页 |
| 4.2.3 饲喂和注射后试虫目标基因表达的RT-PCR检测 | 第72-73页 |
| 4.2.4 不同注射量之间的比较 | 第73-74页 |
| 4.3 讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 EoGL基因功能验证 | 第76-84页 |
| 5.1 材料与方法 | 第76-78页 |
| 5.1.1 供试材料 | 第76页 |
| 5.1.2 实验处理方法 | 第76-77页 |
| 5.1.2.1 茶尺蠖的RNAi干扰处理 | 第76-77页 |
| 5.1.2.2 茶苗处理 | 第77页 |
| 5.1.3 总RNA提取 | 第77页 |
| 5.1.4 cDNA第一链的合成 | 第77页 |
| 5.1.5 引物设计 | 第77-78页 |
| 5.1.6 试虫实时荧光定量PCR | 第78页 |
| 5.1.7 茶树叶片实时荧光定量PCR | 第78页 |
| 5.1.8 数据统计分析 | 第78页 |
| 5.2 结果与分析 | 第78-82页 |
| 5.2.1 不同处理茶树CsADH的表达量 | 第78-79页 |
| 5.2.2 不同处理茶树CsLOX的表达量 | 第79-80页 |
| 5.2.3 不同处理茶树CsHPL的表达量 | 第80-81页 |
| 5.2.4 不同处理茶树CsHMGR1的表达量 | 第81页 |
| 5.2.5 不同处理茶树CsPAL的表达量 | 第81-82页 |
| 5.3 讨论 | 第82-84页 |
| 第六章 总结与展望 | 第84-86页 |
| 6.1 总结 | 第84页 |
| 6.2 展望 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 附录 | 第97-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 作者简历 | 第106-107页 |
| 附件 | 第107页 |
