克胰素（HWTX-Ⅺ）在巴氏毕赤酵母中的表达
| 中英文缩略词表 | 第3-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 毕赤酵母表达外源基因的研究 | 第14-26页 |
| 1.1 毕赤酵母表达系统的特点 | 第15-17页 |
| 1.1.1 毕赤酵母表达的宿主菌 | 第15-16页 |
| 1.1.2 毕赤酵母的表达载体 | 第16-17页 |
| 1.2 实验流程 | 第17-18页 |
| 1.2.1 克隆 | 第17页 |
| 1.2.2 转化 | 第17页 |
| 1.2.3 筛选 | 第17-18页 |
| 1.2.4 表型鉴定 | 第18页 |
| 1.2.5 诱导表达 | 第18页 |
| 1.3 外源蛋白表达的影响因素及策略 | 第18-23页 |
| 1.3.1 表达载体系统 | 第18-20页 |
| 1.3.2 外源基因的性质 | 第20-21页 |
| 1.3.3 培养条件 | 第21-22页 |
| 1.3.4 蛋白酶的降解 | 第22-23页 |
| 1.3.5 发酵参数 | 第23页 |
| 1.4 应用前景与展望 | 第23页 |
| 1.5 本论文研究的背景和意义 | 第23-26页 |
| 第二章 HWTX-Ⅺ的毕赤酵母表达及活性鉴定 | 第26-42页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 载体与菌株 | 第26-27页 |
| 2.1.2 试剂及其它材料 | 第27页 |
| 2.1.3 表达培养基 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第28页 |
| 2.2.2 基因的克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.3 酵母的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.4 多拷贝转化子的筛选及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.5 融合蛋白的表达及电泳鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.6 蛋白纯化与鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.7 重组克胰素的胰蛋白酶抑制结果 | 第33-35页 |
| 2.3 结果 | 第35-41页 |
| 2.3.1 表达载体构建 | 第35-36页 |
| 2.3.2 酵母转化、筛选及表型鉴定 | 第36-38页 |
| 2.3.3 重组克胰素的表达与鉴定 | 第38页 |
| 2.3.4 重组克胰素的分离与纯化 | 第38-40页 |
| 2.3.5 重组克胰素的胰蛋白酶抑制活性 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 rHWTX-Ⅺ的摇瓶表达条件优化 | 第42-50页 |
| 3.1 材料 | 第42页 |
| 3.1.1 菌株 | 第42页 |
| 3.1.2 试剂及其它材料 | 第42页 |
| 3.1.3 培养基 | 第42页 |
| 3.2 方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 菌种保藏 | 第43页 |
| 3.2.2 种子活化 | 第43页 |
| 3.2.3 单因素对HWTX-Ⅺ发酵的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.4 正交实验 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-49页 |
| 3.3.1 诱导温度对HWTX-Ⅺ发酵的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.2 诱导起始pH对HWTX-Ⅺ发酵的影响 | 第46页 |
| 3.3.3 甲醇终浓度对HWTX-Ⅺ发酵的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.4 正交实验结果 | 第47-48页 |
| 3.3.5 最佳收样时间的确定 | 第48页 |
| 3.3.6 溶氧量对HWTX-Ⅺ发酵的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 rHWTX-Ⅺ的10L发酵罐小试初步研究 | 第50-63页 |
| 4.1 前言 | 第50页 |
| 4.2 材料 | 第50-53页 |
| 4.2.1 菌株 | 第50页 |
| 4.2.2 培养基 | 第50-52页 |
| 4.2.3 实验仪器及设备 | 第52-53页 |
| 4.3 方法 | 第53-55页 |
| 4.3.1 培养方法 | 第53页 |
| 4.3.2 各项指标测定 | 第53-54页 |
| 4.3.3 发酵工艺路线 | 第54-55页 |
| 4.4 结果 | 第55-61页 |
| 4.4.1 不同培养基对发酵的影响 | 第55-58页 |
| 4.4.2 发酵工艺的确定 | 第58-60页 |
| 4.4.3 发酵周期 | 第60-61页 |
| 4.5 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
