| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-37页 |
| ·VLCPUFAs 的研究进展 | 第17-26页 |
| ·VLCPUFAs 的命名及分类 | 第17页 |
| ·VLCPUFAs 的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·VLCPUFAs 对人体具有重要生理功能 | 第17页 |
| ·VLCPUFAs 参与植物防御信号途径 | 第17-18页 |
| ·VLCPUFAs 与环境保护 | 第18页 |
| ·VLCPUFAs 的生物合成途径 | 第18-19页 |
| ·VLCPUFAs 合成相关基因 | 第19-21页 |
| ·球等鞭金藻中VLCPUFAs 合成相关基因的克隆 | 第21页 |
| ·马铃薯致病疫霉中VLCPUFAs 合成相关基因的克隆 | 第21-22页 |
| ·强壮前沟藻中VLCPUFAs 合成相关基因的克隆 | 第22页 |
| ·VLCPUFAs 的来源及面临的挑战 | 第22-23页 |
| ·VLCPUFAs 在转基因植物中的生产 | 第23-26页 |
| ·VLCPUFAs 在高等植物中生产的可行性 | 第23-24页 |
| ·VLCPUFAs 在农作物种子中的生产及存在的问题 | 第24-26页 |
| ·多基因聚合技术研究进展 | 第26-36页 |
| ·杂交法 | 第26-27页 |
| ·分次转化法 | 第27-28页 |
| ·共转化法 | 第28页 |
| ·一次转化法 | 第28-29页 |
| ·多聚蛋白酶解法 | 第28-29页 |
| ·独立基因表达盒法 | 第29页 |
| ·独立基因表达盒法研究进展 | 第29-36页 |
| ·借助稀有归巢内切酶的方法 | 第29-30页 |
| ·利用Cre/loxP 重组系统的方法 | 第30-33页 |
| ·基于Gateway 技术的方法 | 第33-36页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-49页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第37页 |
| ·马铃薯致病疫霉及生长条件 | 第37页 |
| ·酿酒酵母YPH500 及生长条件 | 第37页 |
| ·球等鞭金藻及生长条件 | 第37页 |
| ·菌株及质粒 | 第37页 |
| ·酶及生化试剂 | 第37-38页 |
| ·本论文所用引物 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-49页 |
| ·基因组DNA 提取（SDS 法） | 第38页 |
| ·总RNA 的提取（TriZol 法） | 第38-39页 |
| ·RNA 甲醛变性胶电泳检测 | 第39-40页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第40-41页 |
| ·PCR 扩增 | 第41页 |
| ·连接反应 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第42页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第42-43页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第43页 |
| ·去磷酸化反应 | 第43页 |
| ·DNA 片段的回收 | 第43-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第44页 |
| ·酿酒酵母的转化 | 第44-45页 |
| ·酿酒酵母的诱导表达及菌体收集 | 第45页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第45-47页 |
| ·根癌农杆菌冻融法感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·根癌农杆菌电转化感受态制备 | 第46页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第46页 |
| ·电击法转化农杆菌 | 第46-47页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第47-48页 |
| ·种子处理 | 第47页 |
| ·移栽拟南芥 | 第47页 |
| ·拟南芥转化 | 第47-48页 |
| ·转基因植株分析 | 第48页 |
| ·转基因拟南芥植株的GUS 活性组织化学染色 | 第48页 |
| ·脂肪酸的提取及分析 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-91页 |
| ·超长链多不饱和脂肪酸合成相关基因的克隆与功能鉴定 | 第49-68页 |
| ·球等鞭金藻中Δ5 去饱和酶基因的克隆与功能鉴定 | 第49-53页 |
| ·球等鞭金藻脂肪酸成分分析 | 第49页 |
| ·IgD5 全长cDNA 序列的获得 | 第49-50页 |
| ·IgD5 与其它去饱和酶的同源性分析 | 第50-51页 |
| ·IgD5 基因酵母表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·IgD5 去饱和酶在酿酒酵母中活性测定 | 第52-53页 |
| ·马铃薯致病疫霉中去饱和酶基因PinD12、PinD6 和PinD5 的克隆及功能鉴定 | 第53-64页 |
| ·生物信息学的方法获得三个新的脂肪酸去饱和酶基因 | 第53-56页 |
| ·马铃薯致病疫霉的脂肪酸成分分析 | 第56-57页 |
| ·三个去饱和酶基因酵母表达载体的构建 | 第57-60页 |
| ·三个去饱和酶基因在酿酒酵母中的功能鉴定 | 第60-64页 |
| ·强壮前沟藻中DHA 合成相关基因的克隆与功能鉴定 | 第64-68页 |
| ·强壮前沟藻脂肪酸成分分析 | 第64-65页 |
| ·DHA 合成相关基因的EST 序列的筛选 | 第65页 |
| ·DHA 合成相关基因3′端获得 | 第65-66页 |
| ·编号为AcD20 的去饱和酶的全长基因的获得 | 第66-67页 |
| ·酵母表达载体的构建及功能鉴定 | 第67-68页 |
| ·多基因表达载体构建方法的开发设计 | 第68-81页 |
| ·方法原理 | 第68页 |
| ·辅助载体的构建 | 第68-71页 |
| ·多基因表达载体构建方法的验证 | 第71-81页 |
| ·TM2 片段及GUS、GFP、BAR 基因的获得 | 第71-74页 |
| ·各目的片段亚克隆到辅助载体 | 第74-76页 |
| ·过渡载体pAUX-TM2GUSGFPBARTM2 的组装及酶切检测 | 第76-78页 |
| ·植物表达载体pCambia2300-TM23ECTM2 的构建 | 第78-79页 |
| ·GUS、GFP 和BAR 基因在拟南芥中的分子鉴定及表达检测 | 第79-81页 |
| ·EPA 在作物中的异源合成 | 第81-91页 |
| ·EPA 合成相关酶基因的获得 | 第81-83页 |
| ·高山被孢霉Δ5 去饱和酶基因的获得 | 第81页 |
| ·拟南芥Δ15 去饱和酶基因的获得 | 第81-82页 |
| ·马铃薯致病疫霉Δ17 去饱和酶基因的获得 | 第82页 |
| ·眼虫藻Δ8 去饱和酶基因的获得 | 第82-83页 |
| ·球等鞭金藻Δ9 链延长酶基因的获得 | 第83页 |
| ·亚克隆各个基因到辅助载体pAUX2 | 第83-86页 |
| ·球等鞭金藻Δ9 链延长酶基因的亚克隆 | 第83-84页 |
| ·眼虫藻Δ8 去饱和酶基因的亚克隆 | 第84页 |
| ·高山被孢霉Δ5 去饱和酶基因的亚克隆 | 第84-85页 |
| ·拟南芥Δ15 去饱和酶基因的亚克隆 | 第85页 |
| ·马铃薯致病疫霉Δ17 去饱和酶基因的亚克隆 | 第85-86页 |
| ·五个基因表达盒的串联 | 第86-87页 |
| ·植物表达载体pCamBAR-5EC 的获得 | 第87-88页 |
| ·植物表达载体pCamBAR-5EC 的应用 | 第88-91页 |
| 4 讨论 | 第91-101页 |
| 5 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 附录 | 第112-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第116页 |
