| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 条斑紫菜研究概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 条斑紫菜及其食用、经济价值 | 第12-13页 |
| 1.1.2 条斑紫菜的生殖方式及其生活周期 | 第13-15页 |
| 1.1.3 条斑紫菜的研究意义 | 第15页 |
| 1.2 植物CaM基因的研究概况 | 第15-16页 |
| 1.2.1 CaM的结构及分布 | 第15-16页 |
| 1.2.2 CaM的作用原理 | 第16页 |
| 1.3 植物HSP70基因的研究概况 | 第16页 |
| 1.4 Ca~(2+)/CaM与HSP70参与热激信号转导通路 | 第16-18页 |
| 1.5 本实验研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的主要技术路线 | 第19-20页 |
| 2 条斑紫菜PyCaM基因的克隆及其功能分析 | 第20-44页 |
| 2.1 条斑紫菜PyCaM基因的克隆 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.2 条斑紫菜PyCaM基因的生物信息学分析预测 | 第23页 |
| 2.3 条斑紫菜PyCaM基因在热胁迫条件下的实时定量表达实验 | 第23-24页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第24页 |
| 2.4 条斑紫菜PyCaM基因的原核表达 | 第24-30页 |
| 2.4.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.4.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.4.2.1 克隆条斑紫菜PyCaM基因 | 第25页 |
| 2.4.2.2 构建重组表达载体 | 第25-26页 |
| 2.4.2.3 原核表达载体的克隆及转化 | 第26页 |
| 2.4.2.4 重组菌株的构建 | 第26页 |
| 2.4.2.5 条斑紫菜PyCaM融合蛋白诱导表达条件的优化 | 第26-30页 |
| 2.5 条斑紫菜PyCaM融合蛋白纯化及浓度测定 | 第30-33页 |
| 2.5.1 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.5.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.6 结果与分析 | 第33-43页 |
| 2.6.1 条斑紫菜总RNA提取 | 第33页 |
| 2.6.2 PCR扩增产物检测与胶回收产物检测 | 第33-34页 |
| 2.6.3 条斑紫菜PyCaM基因的生物信息学预测结果分析 | 第34-39页 |
| 2.6.4 条斑紫菜PyCaM基因在热胁迫条件下的实时定量表达实验结果分析 | 第39-40页 |
| 2.6.5 条斑紫菜PyCaM融合蛋白诱导表达条件的优化结果分析 | 第40-41页 |
| 2.6.6 条斑紫菜PyCaM融合蛋白表达形式检测结果分析 | 第41-42页 |
| 2.6.7 条斑紫菜PyCaM融合蛋白浓度测定结果 | 第42-43页 |
| 2.7 讨论 | 第43-44页 |
| 3 条斑紫菜PyHSP70基因的克隆及其功能分析 | 第44-61页 |
| 3.1 条斑紫菜PyHSP70基因的克隆 | 第44页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第44页 |
| 3.2 条斑紫菜PyHSP70基因的生物信息学分析预测 | 第44页 |
| 3.3 条斑紫菜PyHSP70基因在热胁迫条件下的实时定量表达实验 | 第44-45页 |
| 3.3.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.3.2 实验方法 | 第45页 |
| 3.4 条斑紫菜PyHSP70基因的原核表达 | 第45-46页 |
| 3.4.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.4.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 3.5 条斑紫菜PyHSP70融合蛋白纯化及浓度测定 | 第46页 |
| 3.6 大肠杆菌转PyHSP70基因在高温胁迫下的生长情况测定 | 第46-47页 |
| 3.6.1 实验材料、仪器设备及药品 | 第46页 |
| 3.6.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 3.7 条斑紫菜HSP70融合蛋白ATPase活性测定 | 第47页 |
| 3.7.1 实验材料、仪器设备及药品 | 第47页 |
| 3.7.2 实验方法 | 第47页 |
| 3.8 结果与分析 | 第47-59页 |
| 3.8.1 条斑紫菜总RNA提取 | 第47页 |
| 3.8.2 PCR扩增产物检测与胶回收产物检测 | 第47-48页 |
| 3.8.3 条斑紫菜PyHSP70基因的生物信息学预测结果分析 | 第48-54页 |
| 3.8.4 条斑紫菜PyHSP70基因在热胁迫条件下的实时定量表达实验结果分析 | 第54页 |
| 3.8.5 条斑紫菜PyHSP70融合蛋白诱导表达条件的优化结果分析 | 第54-55页 |
| 3.8.6 条斑紫菜PyHSP70融合蛋白表达形式检测结果分析 | 第55-56页 |
| 3.8.7 条斑紫菜PyHSP70融合蛋白浓度测定结果 | 第56-57页 |
| 3.8.8 37℃和 45℃条件下转pET-28a-PyHSP70大肠杆菌和转pET-28a大肠杆菌的生长曲线测定结果 | 第57页 |
| 3.8.9 47.5℃条件下转pET-28a-PyHSP70大肠杆菌和转pET-28a大肠杆菌的菌体存活率测定结果 | 第57-58页 |
| 3.8.10 不同时间条斑紫菜PyHSP70融合蛋白对应的ATP水解百分比测定结果 | 第58-59页 |
| 3.9 讨论 | 第59-61页 |
| 4 条斑紫菜融合蛋白PyCaM与PyHSP70体外互作实验 | 第61-67页 |
| 4.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第61-62页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 | 第73-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
