| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 中英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-39页 |
| 主要仪器和试剂 | 第18-20页 |
| 1. 构建质粒 | 第20-26页 |
| 1.1. 目的基因引物设计 | 第20-21页 |
| 1.2. 聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR) | 第21-22页 |
| 1.3. 验证 | 第22-23页 |
| 1.4. PCR产物进行双酶切 | 第23-24页 |
| 1.5. 载体酶切 | 第24页 |
| 1.6. 重组质粒 | 第24-25页 |
| 1.7. 转化 | 第25-26页 |
| 1.8. 质粒抽提 | 第26页 |
| 2. 建立稳定的过表达细胞系 | 第26-34页 |
| 2.1. 46C细胞的培养 | 第26-29页 |
| 2.2 细胞转染：脂质体转染法 | 第29-30页 |
| 2.3 借助Western Blotting鉴定是否过表达成功以及验证调控胚胎干细胞自我更新的相关信号通路 | 第30-34页 |
| 3. 胚胎干细胞状态鉴定 | 第34-35页 |
| 3.1. 碱性磷酸酶染色 | 第34页 |
| 3.2. 免疫荧光技术 | 第34-35页 |
| 4. 功能检测 | 第35-39页 |
| 4.1. RNA提取 | 第35页 |
| 4.2 逆转录和实时定量PCR(qRT-QPCR) | 第35-39页 |
| 第三章 结果 | 第39-52页 |
| 1. 构建重组质粒 | 第39-42页 |
| 2. 建立Gadd45g过表达稳定细胞系 | 第42-44页 |
| 3. Gadd45g可以调控胚胎干细胞自我更新状态 | 第44-47页 |
| 4. 探究Gadd45g调控胚胎干细胞自我更新的相关机制 | 第47-50页 |
| 4.1. 多基因检测结果验证Gadd45g影响小鼠胚胎干细胞发育阶段 | 第47-49页 |
| 4.2. 检测Gadd45g对维持小鼠胚胎干细胞相关通路的影响 | 第49-50页 |
| 5. 筛选可以抑制Gadd45g调控作用的细胞因子或化学小分子 | 第50-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-55页 |
| 1. 首次在小鼠胚胎干细胞内探究Gadd45g的功能 | 第52页 |
| 2. Gadd45g影响小鼠胚胎干细胞的增殖且抑制LIF/JAK/STAT3信号通路 | 第52-53页 |
| 3. 第一次证明Gadd45g具有始动胚胎干细胞分化的功能 | 第53页 |
| 4. 筛选得到Y27可以抑制Gadd45g对小鼠胚胎干细胞的促分化作用 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
