| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 斑马鱼及早期胚胎发育 | 第11-12页 |
| 1.2 斑马鱼的基因操作和Tol2转座子 | 第12-16页 |
| 1.2.1 斑马鱼的基因操作 | 第12-13页 |
| 1.2.2 转座子和Tol2转座子 | 第13-16页 |
| 1.3 胚盾特异表达的基因 | 第16-18页 |
| 1.4 本课题研究的目的、内容和意义 | 第18-21页 |
| 第二章 材料和方法 | 第21-35页 |
| 2.1 斑马鱼品系和培养 | 第21页 |
| 2.2 质粒和转座酶mRNA合成 | 第21-22页 |
| 2.3 显微注射和胚胎筛选 | 第22-23页 |
| 2.3.1 胚胎准备 | 第22页 |
| 2.3.2 单细胞显微注射 | 第22-23页 |
| 2.3.3 胚胎培养和突变体品系筛选 | 第23页 |
| 2.4 质粒大提、基因组和总RNA提取 | 第23-26页 |
| 2.4.1 质粒大提 | 第23-24页 |
| 2.4.2 基因组提取 | 第24-25页 |
| 2.4.3 简易基因组提取 | 第25页 |
| 2.4.4 胚胎总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.5 TAI1-PCR和5'RLM-RACE | 第26-30页 |
| 2.5.1 热不对称交错PCR(TAIL-PCR) | 第26-28页 |
| 2.5.2 5' RLM-RACE | 第28-30页 |
| 2.6 探针RNA合成和原位杂交 | 第30-32页 |
| 2.6.2 整胚原位杂交 | 第30-32页 |
| 2.7 GFP阳性细胞的分离富集 | 第32页 |
| 2.8 流式细胞仪操作(Flow cytometry) | 第32-33页 |
| 2.9 荧光实时定量PCR和半定量RT-PCR | 第33-35页 |
| 2.9.1 荧光实时定量PCR | 第33页 |
| 2.9.2 半定量RT-PCR(Semi-quantitative Reverse Transcription PCR) | 第33-35页 |
| 第三章 结果 | 第35-53页 |
| 3.1 Tol2：20141017m品系和si：ch73-52f24.4 | 第35-41页 |
| 3.1.1 检测Tol2：20141017m GFP在不同发育时期的表达图式 | 第35-36页 |
| 3.1.2 Tol2：20141017m品系母源表达的不完全性 | 第36-37页 |
| 3.1.3 基因连锁分析si：ch73-52f24.4和Tol2转座子之间是连锁的 | 第37-38页 |
| 3.1.4 TAIL-PCR鉴定到基因所在位置 | 第38-39页 |
| 3.1.5 原位杂交证明确实为该基因 | 第39页 |
| 3.1.6 表型分析发现该品系在外包过程中有缺陷 | 第39-41页 |
| 3.2 Tol2：20141221t品系和sat1.a | 第41-47页 |
| 3.2.1 检测Tol2：20141221t品系胚胎中GFP在不同发育时期的表达图式 | 第41-42页 |
| 3.2.2 鉴定到Tol2：20141221t品系中Tol2转座子捕获的基因为sat1.a | 第42-43页 |
| 3.2.3 sat1.a基因具有与Tol2：20141221t品系GFP相似的表达图式 | 第43-45页 |
| 3.2.4 sat1.a突变体没有明显的发育缺陷 | 第45-46页 |
| 3.2.5 发现与预期不相符的表型 | 第46-47页 |
| 3.3 斑马鱼胚胎胚盾特异表达基因的鉴定 | 第47-53页 |
| 3.3.1 Tg(gsc：GFP)转基因斑马鱼胚胎适合于分离富集胚盾中胚层细胞 | 第47-48页 |
| 3.3.2 流式细胞分选获得高纯度的GFP阳性细胞 | 第48-49页 |
| 3.3.3 系统鉴定胚盾高表达基因 | 第49-51页 |
| 3.3.4 原位杂交确定胚盾特异表达的基因 | 第51-53页 |
| 第四章 结论和讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 捕获到一个lncRNA | 第53页 |
| 4.2 sat1.a可以作为一个神经系统分子标记 | 第53-54页 |
| 4.3 突变体中GFP的翻译并不一定依赖插入基因的启动密码子 | 第54页 |
| 4.4 Tol2介导的基因捕获技术一个非常好的正向遗传学研究工具 | 第54页 |
| 4.5 我们鉴定到胚盾高表达基因 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-69页 |
| 测序结果 | 第63-65页 |
| Tol2：20141017m品系TAIL-PCR测序结果(T3-3) | 第63页 |
| Tol2：20141017m品系cDNA鉴定测序结果(连接载体PUC19测序引物M13F) | 第63-64页 |
| Tol2：20141221t品系TAIL-PCR测序结果(引物T3-3) | 第64页 |
| Tol2：20141221t品系5'RACE测序结果(引物eGFP1) | 第64-65页 |
| 试剂配制 | 第65-69页 |
| 质粒大提试剂 | 第65页 |
| 基因组提取试剂 | 第65页 |
| 原位杂交所需溶液的配制 | 第65-67页 |
| 流式细胞所需溶液配制 | 第67-69页 |
| 发表文章与获奖情况 | 第69-71页 |
| 发表文章 | 第69页 |
| 获奖情况 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
