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猪圆环病毒2型感染性克隆构建及抗体检测ELISA方法的建立

摘要第7-9页
Abstract第9-10页
缩略语表(Abbreviation)第11-13页
第1章 文献综述第13-33页
    1.1 猪圆环病毒病的病原学研究第13-14页
        1.1.1 猪圆环病毒1型第13页
        1.1.2 猪圆环病毒2型第13-14页
    1.2 猪圆环病毒2型的基因与蛋白第14-16页
        1.2.1 PCV2的基因组特征第14-15页
        1.2.2 PCV2编码的蛋白质及功能第15-16页
    1.3 PCV2的复制机制第16-18页
        1.3.1 复制元件第17页
        1.3.2 滚环复制模型第17-18页
    1.4 猪圆环病毒病流行病学特征第18-19页
    1.5 猪圆环病毒相关性疾病第19-22页
        1.5.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)第20页
        1.5.2 猪皮炎肾病综合征(PDNS)第20-21页
        1.5.3 猪呼吸系统综合征(PRDC)第21页
        1.5.4 繁殖障碍第21页
        1.5.5 先天性震颤(CT)第21-22页
        1.5.6 肠炎第22页
    1.6 PCV2的致病机理第22-23页
    1.7 PCV2诊断技术第23-26页
        1.7.1 病原学诊断方法第23-25页
        1.7.2 血清学诊断方法第25-26页
    1.8 PCV2疫苗研究进展第26-31页
        1.8.1 PCV2商品化疫苗第26-28页
        1.8.2 PCV2新型疫苗的研究第28-30页
        1.8.3 PCV2疫苗免疫策略第30-31页
    1.9 猪圆环病毒病的防制措施第31-33页
第二章 研究目的与意义第33-34页
第三章 猪圆环病毒2型感染性克隆的构建第34-50页
    3.1 实验材料第34-35页
        3.1.1 毒株及细胞第34页
        3.1.2 主要试剂及仪器第34页
        3.1.3 培养基与相关试剂的配制第34-35页
    3.2 实验方法第35-42页
        3.2.1 带Hind Ⅲ分子标记PCV2基因组重组质粒的构建第35-39页
        3.2.2 病毒基因组的自环化及克隆毒株的拯救第39页
        3.2.3 克隆毒株的传代第39-40页
        3.2.4 分子标记病毒H-PCV2的鉴定第40-41页
        3.2.5 分子标记病毒H-PCV2生物学特性的测定第41-42页
    3.3 结果与分析第42-47页
        3.3.1 PCV2全基因组的扩增及带Hind Ⅲ酶切位点PCV2基因组的构建第42-44页
        3.3.2 拯救毒株全基因组序列的测定及PCR限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)第44-45页
        3.3.3 H-PCV2生物学特性的测定第45-47页
    3.4 讨论第47-50页
        3.4.1 猪圆环病毒病DNA疫苗的研究第47-48页
        3.4.2 PCV2分子标记疫苗研究的必要性第48-49页
        3.4.3 感染性克隆技术的应用第49-50页
第四章 基于猜圈环病毒2型ORF9间接ELISA方法的建立第50-71页
    4.1 实验材料第50-51页
        4.1.1 标准毒株、细胞与血清第50页
        4.1.2 实验动物第50页
        4.1.3 主要试剂第50页
        4.1.4 主要仪器及耗材第50页
        4.1.5 主要缓冲液的配制第50-51页
    4.2 实验方法第51-55页
        4.2.1 PCV2序列分析与短肽合成第51页
        4.2.2 验证短肽的反应原性第51-52页
        4.2.3 基于合成短肽的PCV2抗体检测间接ELISA方法的建立第52-55页
    4.3 结果与分析第55-68页
        4.3.1 PCV2序列分析与短肽合成第55-59页
        4.3.2 合成短肽的反应原性分析第59-60页
        4.3.3 ORF9p-ELISA检测方法的建立第60-68页
    4.4 讨论第68-71页
        4.4.1 基于PCV2 Cap蛋白ELISA检测方法的应用第68-69页
        4.4.2 PCV2中新靶标的预测与鉴定第69页
        4.4.3 ORF9p-ELISA诊断方法的建立与优化第69-71页
第五章 结论第71-72页
参考文献第72-90页
致谢第90页

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