| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 水貂肠炎病毒 | 第13-18页 |
| 1.1.1 生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 基因组结构 | 第14-15页 |
| 1.1.3 遗传进化 | 第15-16页 |
| 1.1.4 转铁蛋白受体 | 第16-17页 |
| 1.1.5 疫苗研究 | 第17-18页 |
| 1.1.6 诊断方法 | 第18页 |
| 1.2 免疫胶体金层析技术 | 第18-20页 |
| 1.2.1 免疫胶体金技术简介 | 第18-19页 |
| 1.2.2 胶体金技术的优点及不足 | 第19页 |
| 1.2.3 胶体金免疫层析技术的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 水貂肠炎病毒VP2基因原核表达及鉴定 | 第22-32页 |
| 2.1 试验材料 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 病毒基因组的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 VP2基因的克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.3 表达载体的构建与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.4 原核表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第25页 |
| 2.2.5 重组蛋白最佳表达条件的筛选 | 第25页 |
| 2.2.6 重组蛋白的变性 | 第25-26页 |
| 2.2.7 重组蛋白的纯化 | 第26页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE分析 | 第26页 |
| 2.2.9 重组蛋白的Western blotting鉴定 | 第26页 |
| 2.3 结果 | 第26-30页 |
| 2.3.1 MEV VP2基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组克隆质粒酶切鉴定 | 第27页 |
| 2.3.3 重组克隆质粒测序鉴定 | 第27页 |
| 2.3.4 重组表达质粒酶切鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.5 重组表达质粒测序鉴定 | 第28页 |
| 2.3.6 表达产物SDS-PAGE分析 | 第28页 |
| 2.3.7 优化目的蛋白可溶性表达 | 第28-30页 |
| 2.3.8 重组蛋白Western-blotting鉴定 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 水貂肠炎病毒单克隆抗体的制备 | 第32-41页 |
| 3.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.1 种毒、动物与细胞系 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂和耗材 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-37页 |
| 3.2.1 抗原的制备 | 第32-33页 |
| 3.2.2 动物免疫 | 第33页 |
| 3.2.3 间接ELISA法检测血清效价 | 第33-34页 |
| 3.2.4 杂交瘤细胞株的制备 | 第34-35页 |
| 3.2.5 阳性杂交瘤细胞筛选方法的建立 | 第35页 |
| 3.2.6 阳性杂交瘤细胞的亚克隆（有限稀释法） | 第35页 |
| 3.2.7 McAb大量制备 | 第35页 |
| 3.2.8 McAb腹水纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.9 McAb鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3 结果 | 第37-39页 |
| 3.3.1 抗原的纯化 | 第37页 |
| 3.3.2 间接ELISA方法的建立 | 第37页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞的融合和筛选 | 第37页 |
| 3.3.4 单克隆抗体的特性鉴定 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.4.1 免疫抗原的制备 | 第39页 |
| 3.4.2 免疫动物的选择 | 第39页 |
| 3.4.3 免疫程序的确定 | 第39页 |
| 3.4.4 杂交瘤细胞筛选 | 第39页 |
| 3.4.5 杂交瘤细胞亚克隆 | 第39-40页 |
| 3.4.6 腹水的制备及纯化 | 第40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 水貂肠炎病毒胶体金快速检测试纸条研制 | 第41-51页 |
| 4.1 试验材料 | 第41页 |
| 4.2 方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 单克隆抗体预处理 | 第41页 |
| 4.2.2 玻璃器皿酸化和硅化处理 | 第41-42页 |
| 4.2.3 20 nm胶体金溶液的制备 | 第42页 |
| 4.2.4 胶体金溶液的质量鉴定 | 第42页 |
| 4.2.5 免疫胶体金探针制备及其鉴定 | 第42-43页 |
| 4.2.6 胶体金试纸条的制备 | 第43页 |
| 4.2.7 胶体金检测原理及结果判断 | 第43-44页 |
| 4.2.8 试纸条特异性试验 | 第44页 |
| 4.2.9 试纸条灵敏度试验 | 第44页 |
| 4.2.10 试纸条稳定性试验 | 第44页 |
| 4.2.11 胶体金试纸条初步应用 | 第44页 |
| 4.3 结果 | 第44-49页 |
| 4.3.1 胶体金溶液的制备及鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.2 胶体金与抗体结合的最佳pH值确定 | 第45-46页 |
| 4.3.3 胶体金与抗体结合的最佳浓度确定 | 第46页 |
| 4.3.4 胶体金探针的鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3.5 硝酸纤维素膜（NC膜）的选择 | 第47页 |
| 4.3.6 胶体金试纸条的组装和结果的判定 | 第47-48页 |
| 4.3.7 胶体金试纸条性能试验 | 第48-49页 |
| 4.3.8 胶体金试纸条初步应用 | 第49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-50页 |
| 4.4.1 胶体金的制备 | 第49页 |
| 4.4.2 免疫胶体金探针的制备 | 第49-50页 |
| 4.4.3 制备胶体金试纸条耗材的选择 | 第50页 |
| 4.5 小结 | 第50-51页 |
| 第五章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |