| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 海藻糖和海藻糖合酶的研究现状 | 第10-14页 |
| 1.1.1 海藻糖简介 | 第10页 |
| 1.1.2 生产海藻糖的方法 | 第10-11页 |
| 1.1.3 海藻糖的应用前景 | 第11-12页 |
| 1.1.4 海藻糖合酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.1.5 海藻糖合酶分子生物学方面的研究 | 第13-14页 |
| 1.2 表面展示技术研究概况 | 第14-17页 |
| 1.2.1 芽孢表面展示系统 | 第15页 |
| 1.2.2 芽孢的结构与形成 | 第15-16页 |
| 1.2.3 枯草芽孢杆菌芽孢表面展示系统的优势 | 第16-17页 |
| 1.2.4 枯草芽孢杆菌芽孢表面展示技术的应用 | 第17页 |
| 1.3 增强型绿色荧光蛋白简介与应用 | 第17-18页 |
| 1.3.1 绿色荧光蛋白的来源与特点 | 第17-18页 |
| 1.3.2 EGFP在芽孢表面展示系统中的应用 | 第18页 |
| 1.4 立题背景和研究内容 | 第18-22页 |
| 1.4.1 立题背景 | 第18-19页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第19-22页 |
| 第2章 荧光蛋白基因克隆与枯草芽孢杆菌芽孢表面展示系统的构建 | 第22-48页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 其他常用试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2.5 主要仪器和设备 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.3.1 枯草芽孢杆菌（B.subtilis 168）基因组的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 编码芽孢衣壳蛋白基因cotC的克隆 | 第26页 |
| 2.3.3 PCR产物的核酸凝胶电泳鉴定与胶回收 | 第26-27页 |
| 2.3.4 amyEF基因与amyER基因的克隆与验证 | 第27页 |
| 2.3.5 pEGFP-N1质粒的提取与验证 | 第27-28页 |
| 2.3.6 质粒PCR反应体系与扩增程序 | 第28页 |
| 2.3.7 pHT01质粒的提取与验证 | 第28页 |
| 2.3.8 线性化克隆载体pTOPO-amyEF-CotC-egfp的制备 | 第28-31页 |
| 2.3.9 重组质粒pTOPO-cotC-egfp的构建 | 第31-33页 |
| 2.3.10 Pme I线性化重组质粒pTOPO-cotC-egfp及重组质粒的浓缩 | 第33页 |
| 2.3.11 线性化的重组质粒转化B.subtilis 168 | 第33-34页 |
| 2.3.12 重组菌B. Subtilis 168/pTOPO-cotC-egfp的筛选与鉴定 | 第34页 |
| 2.3.13 芽孢衣壳蛋白基因cotB、cotG和cotX的PCR扩增与胶回收 | 第34页 |
| 2.3.14 整合型表达质粒B. Subtilis 168-cot BGX-egfp的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.15 表面展示EGFP重组质粒的转化与重组子的筛选鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.16 重组菌芽孢悬浮液的制备 | 第36页 |
| 2.3.17 枯草芽孢杆菌芽孢表面表达EGFP的情况分析 | 第36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-47页 |
| 2.4.1 枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第36-37页 |
| 2.4.2 质粒pEGFP-N1和pHT01的提取 | 第37-38页 |
| 2.4.3 目的基因的扩增 | 第38-39页 |
| 2.4.4 整合型重组质粒的构建及重组子的筛选与鉴定 | 第39-41页 |
| 2.4.5 枯草芽孢杆菌转化子菌落PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4.6 芽孢蛋白基因cotB、cotG、cot X的扩增 | 第42页 |
| 2.4.7 重组T载体的构建及菌落PCR验证 | 第42-44页 |
| 2.4.8 重组枯草芽孢杆菌转化子菌落PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 2.4.9 荧光显微镜观察与流式细胞仪分析 | 第45-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第3章 海藻糖合酶芽孢表面展示系统的构建 | 第48-54页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料 | 第48-49页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第48-49页 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 | 第49页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第49页 |
| 3.2.4 引物设计 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-50页 |
| 3.3.1 海藻糖合酶基因的扩增 | 第49页 |
| 3.3.2 重组枯草芽孢杆菌B. Subtilis 168/pTOPO-cotC-tres的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.3 芽孢表面展示海藻糖合酶的检测及酶活测定 | 第50页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第50-52页 |
| 3.4.1 目的基因tres的扩增 | 第50-51页 |
| 3.4.2 重组质粒pTOPO-cotC-tres的构建 | 第51-52页 |
| 3.4.3 B.Subtilis 168/pTOPO-cotC-tres外源蛋白的检测及酶活测定 | 第52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第4章 重组枯草芽孢杆菌产芽孢发酵条件及酶学性质研究 | 第54-64页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.2.1 菌株 | 第54页 |
| 4.2.2 培养基 | 第54-55页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-56页 |
| 4.3.1 种子培养方法 | 第55页 |
| 4.3.2 发酵方法 | 第55页 |
| 4.3.3 海藻糖合酶酶活定义 | 第55-56页 |
| 4.4 芽孢表面展示海藻糖合酶的酶学性质研究 | 第56页 |
| 4.4.1 表面展示海藻糖合酶的最适反应温度及温度耐受性研究 | 第56页 |
| 4.4.2 表面展示海藻糖合酶的最适反应pH及pH耐受性研究 | 第56页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第56-63页 |
| 4.5.1 碳源优化结果 | 第56-57页 |
| 4.5.2 氮源优化结果 | 第57-58页 |
| 4.5.3 无机盐优化结果 | 第58-59页 |
| 4.5.4 不同pH对芽孢形成的影响 | 第59-60页 |
| 4.5.5 不同温度对芽孢形成的影响 | 第60页 |
| 4.5.6 表面展示海藻糖合酶的最适反应温度及温度耐受性研究 | 第60-62页 |
| 4.5.7 表面展示海藻糖合酶的最适反应pH及pH耐受性研究 | 第62-63页 |
| 4.6 本章小结 | 第63-64页 |
| 第5章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 5.1 结论 | 第64-65页 |
| 5.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第74页 |
