中文摘要 | 第4-5页 |
英文摘要 | 第5页 |
1 绪论 | 第8-23页 |
1.1 高通量药物筛选 | 第8-14页 |
1.1.1 药物筛选模型 | 第8-11页 |
1.1.2 高通量的样品库 | 第11-13页 |
1.1.3 自动化工作站 | 第13页 |
1.1.4 高效率的数据处理系统 | 第13-14页 |
1.2 G蛋白偶联受体是高通量筛选的重要药靶 | 第14-15页 |
1.3 G蛋白偶联受体高通量筛选 | 第15-23页 |
1.3.1 基于结合分析的检测方法 | 第16-17页 |
1.3.2 基于第二信使的检测方法 | 第17-20页 |
1.3.3 基于功能反应的报告基因检测 | 第20-22页 |
1.3.4 筛选方法的比较 | 第22-23页 |
2 毒蕈胆碱M1受体 | 第23-28页 |
2.1 毒蕈胆碱M样受体家族 | 第23-25页 |
2.1.1 M受体的四个亚型 | 第23-24页 |
2.1.2 M1受体信号通路 | 第24页 |
2.1.3 M1受体激动剂 | 第24-25页 |
2.2 M1受体、阿尔茨海默(AD)病与中药 | 第25-28页 |
3 毒蕈胆碱M1受体激动剂高通量筛选模型的建立 | 第28-36页 |
3.1 筛选模型设计 | 第28-30页 |
3.1.1 基本原理 | 第28页 |
3.1.2 响应元件及启动子的选择 | 第28-29页 |
3.1.3 报告基因的选择 | 第29-30页 |
3.2 毒蕈碱M1受体激动剂高通量筛选模型-M1细胞株的建立 | 第30-36页 |
3.2.1 材料 | 第30页 |
3.2.2 M1受体质粒(M1/pcDNA3.1(+))构建 | 第30-33页 |
3.2.3 报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC/pGL3) | 第33页 |
3.2.4 M1稳定细胞株的建立 | 第33-34页 |
3.2.5 阴性细胞株的建立 | 第34-36页 |
4 筛选条件的优化及筛选模型的评估 | 第36-42页 |
4.1 筛选条件优化 | 第36-38页 |
4.1.1 96 孔板的细胞接种数目 | 第36-37页 |
4.1.2 荧光素酶的表达时间 | 第37页 |
4.1.3 Bright-Glo试剂用量 | 第37-38页 |
4.2 筛选模型的评估 | 第38-40页 |
4.2.1 Z′因子分析 | 第38-39页 |
4.2.2 Well-to-Well波动性检测 | 第39-40页 |
4.2.3 Plate-to-Plate波动性检测 | 第40页 |
4.3 M1细胞株内源性干扰检测 | 第40-42页 |
5 中药提取库 | 第42-45页 |
5.1 中药的选择 | 第42页 |
5.2 中药提取 | 第42-45页 |
5.2.1 仪器装置 | 第43页 |
5.2.2 提取流程 | 第43-45页 |
6 M1受体激动剂的筛选 | 第45-47页 |
6.1 M1细胞株的中药提取物的筛选 | 第45页 |
6.2 阴性细胞株的中药提取物的筛选 | 第45-47页 |
7 中药活性成分的分离 | 第47-49页 |
7.1 实验材料及仪器 | 第47页 |
7.2 实验方法 | 第47-48页 |
7.3 讨论 | 第48-49页 |
8 总结及展望 | 第49-50页 |
致谢 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-56页 |
附录 | 第56页 |