| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 缩略语 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述与试验设计 | 第15-31页 |
| 第一章 HMG蛋白的结构与功能 | 第16-29页 |
| 前言 | 第16页 |
| 1. HMG蛋白的结构 | 第16-23页 |
| ·HMGA亚家族 | 第17-20页 |
| ·HMGA的结构特征 | 第17-18页 |
| ·HMGA的转录后修饰 | 第18-20页 |
| ·HMGB亚家族 | 第20-22页 |
| ·HMGB结构特征 | 第20-21页 |
| ·HMGB的转录后修饰 | 第21-22页 |
| ·HMGN亚家族 | 第22-23页 |
| ·HMGN结构特征 | 第22-23页 |
| ·HMGN的转录后修饰 | 第23页 |
| 2. HMG蛋白的功能 | 第23-28页 |
| ·HMGA的多种功能 | 第23-26页 |
| ·HMGA在可诱导基因转录中的调控作用 | 第24-25页 |
| ·HMGA在改变染色体结构的作用 | 第25页 |
| ·HMGA在胚胎发生和分化中的作用 | 第25-26页 |
| ·HMGA在肿瘤产生,转移中的作用 | 第26页 |
| ·HMGA在病毒整合和表达中的作用 | 第26页 |
| ·HMGB的功能 | 第26-27页 |
| ·HMGN的功能 | 第27-28页 |
| 3. 家蚕HMGA蛋白研究现状与展望 | 第28-29页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第29-31页 |
| 1. 研究目的和意义 | 第29页 |
| 2. 研究内容 | 第29-30页 |
| 3. 实验流程图 | 第30-31页 |
| 第二部分 研究论文 | 第31-84页 |
| 第一章 生物信息学分析 | 第32-39页 |
| 1. 生物信息学工具 | 第32页 |
| 2. 分析流程及结果 | 第32-37页 |
| ·基因序列的比对 | 第32-33页 |
| ·家蚕BmHMGA基因cDNA的生物信息学分析 | 第33页 |
| ·家蚕BmHMGA基因的结构分析 | 第33-34页 |
| ·家蚕BmHMGA基因推测的氨基酸序列生物信息学分析 | 第34-35页 |
| ·疏水性分析 | 第34页 |
| ·信号肽分析 | 第34-35页 |
| ·跨膜区分析 | 第35页 |
| ·家蚕BmHMGA蛋白二级结构预测 | 第35-36页 |
| ·BmHMGA蛋白定位的预测 | 第36页 |
| ·家蚕BmHMGA基因推测的氨基酸序列同源性分析 | 第36-37页 |
| ·HMGA进化树的构建 | 第37页 |
| 3. 讨论 | 第37-39页 |
| 第二章 BmHMGA的表达与纯化 | 第39-57页 |
| 1. 材料与试剂 | 第39-43页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·订购试剂 | 第39页 |
| ·自配试剂 | 第39-43页 |
| 2. 方法 | 第43-50页 |
| ·家蚕BmHMGA基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·BmHMGA基因的获得 | 第43页 |
| ·特异性引物的设计与合成 | 第43页 |
| ·PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·纯化回收PCR产物 | 第44页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmHMGA的构建 | 第44-47页 |
| ·质粒pET-28a(+)提取 | 第44页 |
| ·目的片段与pET-28a(+)载体双酶切与回收 | 第44-45页 |
| ·连接反应 | 第45页 |
| ·TG1感受态细胞制备 | 第45页 |
| ·连接产物的转化 | 第45-46页 |
| ·筛选阳性克隆与质粒提取 | 第46页 |
| ·PCR鉴定 | 第46页 |
| ·双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第47页 |
| ·家蚕BmHMGA基因的表达 | 第47-49页 |
| ·BL21star感受态细胞制备 | 第47页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmHMGA的转化 | 第47页 |
| ·PCR与双酶切鉴定 | 第47页 |
| ·His-BmHMGA融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第48-49页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白表达产物存在形式检测 | 第49页 |
| ·Ni-NTA柱纯化融合蛋白 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白的质谱分析 | 第50页 |
| 3. 结果 | 第50-55页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第50-51页 |
| ·PCR产物与载体pET-28a(+)的双酶切 | 第51页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmHMGA的鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmHMGA测序 | 第52-53页 |
| ·His-BmHMGA融合蛋白的表达 | 第53页 |
| ·融合蛋白表达形式的确定及蛋白纯化 | 第53-54页 |
| ·融合蛋白质谱分析 | 第54-55页 |
| 4.讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 抗体制备及特异性分析 | 第57-65页 |
| 1. 材料与试剂 | 第57-59页 |
| ·主要材料及仪器 | 第57页 |
| ·订购试剂 | 第57页 |
| ·自配试剂 | 第57-59页 |
| 2. 方法 | 第59-62页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第59-60页 |
| ·抗原的制备 | 第59页 |
| ·免疫新西兰兔 | 第59页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第59-60页 |
| ·抗体的纯化 | 第60页 |
| ·间接ELISA法测定抗体效价 | 第60-61页 |
| ·抗体特异性检测 | 第61-62页 |
| 3. 结果 | 第62-64页 |
| ·抗体纯化 | 第62-63页 |
| ·间接ELISA法测定抗体效价 | 第63页 |
| ·Western blotting检测抗体的特异性 | 第63-64页 |
| 4. 讨论 | 第64-65页 |
| 第四章 家蚕BmHMGA基因转录差异检测 | 第65-74页 |
| 1. 材料与试剂 | 第65页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第65页 |
| 2. 方法 | 第65-68页 |
| ·总RNA的提取 | 第65-66页 |
| ·总RNA的浓度的测量 | 第66页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计 | 第66页 |
| ·荧光定量PCR | 第66-68页 |
| ·逆转录反应 | 第66-67页 |
| ·Real -time PCR反应 | 第67-68页 |
| ·荧光定量PCR数据分析 | 第68页 |
| 3. 结果 | 第68-72页 |
| ·各组织及时期总RNA浓度测定 | 第68页 |
| ·家蚕发育过程中BmHMG月基因RT-PCR结果 | 第68-70页 |
| ·荧光定量PCR扩增曲线与融解曲线 | 第68-69页 |
| ·家蚕四个发育时期BmHMGA基因转录水平分析 | 第69-70页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmHMGA基因转录水平的检测 | 第70-72页 |
| ·荧光定量PCR扩增曲线与融解曲线 | 第70-71页 |
| ·五龄幼虫各组织BmHMGA基因转录水平分析 | 第71-72页 |
| 4. 讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 家蚕BmHMGA蛋白表达情况分析 | 第74-80页 |
| 1. 材料与试剂 | 第74-75页 |
| ·材料 | 第74页 |
| ·订购试剂 | 第74页 |
| ·自配试剂 | 第74-75页 |
| 2. 方法 | 第75-76页 |
| ·家蚕五龄幼虫不同组织总蛋白的提取 | 第75页 |
| ·Western blotting检测BmHMGA蛋白的分布 | 第75页 |
| ·ELISA半定量标准曲线制作 | 第75页 |
| ·测定各时期总蛋白中BmHMGA的含量 | 第75-76页 |
| ·测定各组织总蛋白中BmHMGA的含量 | 第76页 |
| 3. 结果 | 第76-79页 |
| ·Western blotting检测BmHMGA蛋白在家蚕各时期表达量 | 第76页 |
| ·Western blotting检测BmHMGA蛋白在家蚕组织中的分布 | 第76页 |
| ·ELISA标准曲线制作 | 第76-77页 |
| ·BmHMGA蛋白在家蚕各时期中的分布 | 第77-78页 |
| ·BmHMGA蛋白在五龄幼虫各组织中的分布 | 第78-79页 |
| 4. 讨论 | 第79-80页 |
| 第六章 BmHMGA蛋白亚细胞定位分析 | 第80-84页 |
| 1. 材料与试剂 | 第80-81页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·订购试剂 | 第80页 |
| ·自配试剂 | 第80-81页 |
| 2. 方法 | 第81页 |
| 3. 结果 | 第81-82页 |
| 4. 讨论 | 第82-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
