| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 Prohibitin 的研究进展 | 第14-23页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 Prohibitin 的结构与定位 | 第14-16页 |
| ·结构和分类 | 第14页 |
| ·定位 | 第14-16页 |
| 2 Prohibitin 的生物学功能 | 第16-20页 |
| ·分子伴侣作用 | 第16-17页 |
| ·维持线粒体的结构与功能 | 第17-19页 |
| ·参与细胞周期调控 | 第19页 |
| ·抗细胞衰老 | 第19-20页 |
| ·抗凋亡作用 | 第20页 |
| 3 Prohibitin 在疾病防治中的作用 | 第20-22页 |
| ·与肿瘤的关系 | 第20-21页 |
| ·治疗肥胖症的药物靶标蛋白 | 第21页 |
| ·治疗糖尿病的药物靶标蛋白 | 第21-22页 |
| 展望 | 第22-23页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第23-25页 |
| 1 研究目的和意义 | 第23页 |
| 2 研究内容 | 第23-24页 |
| 3 实验流程 | 第24-25页 |
| 第三章 序列分析 | 第25-33页 |
| 1 生物信息学工具 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-32页 |
| ·Bmphb 基因序列 | 第25-27页 |
| ·保守结构域的预测 | 第27页 |
| ·疏水性分析 | 第27-28页 |
| ·二级结构的预测 | 第28页 |
| ·BmPHB 蛋白高级结构的预测 | 第28-29页 |
| ·BmPHB 蛋白定位的预测 | 第29页 |
| ·BmPHB 氨基酸序列同源性分析 | 第29-30页 |
| ·进化树的构建 | 第30-31页 |
| ·电子表达谱预测 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 家蚕Bmphb 基因的克隆与原核表达 | 第33-45页 |
| 1 材料与试剂 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·试剂的配制 | 第34-36页 |
| 2 方法 | 第36-41页 |
| ·Bmphb 基因的克隆 | 第36-40页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的转化 | 第41页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bmphb 的表达与鉴定 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-44页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bmphb 的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第43页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 重组蛋白的纯化和多克隆抗体的制备 | 第45-58页 |
| 1 材料与试剂 | 第45-48页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·订购试剂 | 第45页 |
| ·主要试剂的配制 | 第45-48页 |
| 2 方法 | 第48-52页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第48-50页 |
| ·多克隆抗体的制备及纯化 | 第50-51页 |
| ·抗体的效价测定 | 第51页 |
| ·Western blotting 检测 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-56页 |
| ·融合蛋白表达形式的确定及蛋白纯化 | 第52-53页 |
| ·纯化BmPHB 的质谱鉴定 | 第53-54页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第54页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第54-55页 |
| ·Western blotting 检测抗体的特异性 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 Bm PHB 在家蚕发育各时期及组织的分布 | 第58-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第58-61页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·订购试剂 | 第58页 |
| ·试剂的配制 | 第58-61页 |
| 2 方法 | 第61-62页 |
| ·家蚕不同发育时期及五龄幼虫不同组织总蛋白的提取 | 第61页 |
| ·Western blotting 检测BmPHB 蛋白在家蚕不同发育时期及五龄幼虫不同组织中的分布 | 第61-62页 |
| 3 结果 | 第62-63页 |
| ·Western blotting 检测家蚕发育各时期BmPHB 的表达量变化 | 第62页 |
| ·Western blotting 检测五龄幼虫各组织中BmPHB 表达量的变化 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 第七章 BmPHB 在 Bm5 细胞中的亚细胞定位分析 | 第64-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第64页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·试剂的配制 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
