| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 符号及缩略语 | 第15-16页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-34页 |
| 1 P-gp概述 | 第17-18页 |
| 1.1 P-gp的表达分布 | 第17页 |
| 1.2 P-gp的结构 | 第17页 |
| 1.3 P-gp功能 | 第17-18页 |
| 2 P-gp表达和功能的调控机制 | 第18-22页 |
| 2.1 病理因素 | 第18-19页 |
| 2.2 应激状态 | 第19页 |
| 2.3 化合物诱导 | 第19-22页 |
| 3 P-gp体内外研究方法 | 第22-25页 |
| 3.1 体外法 | 第22-24页 |
| 3.2 在体肠灌流法 | 第24页 |
| 3.3 外翻囊法 | 第24-25页 |
| 4 黄连素对P-gp表达和功能的影响 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-34页 |
| 第二章 肉鸡Abcb1基因的克隆及生物信息学分析 | 第34-48页 |
| 1 材料与方法 | 第35-37页 |
| 1.1 试剂和质粒 | 第35页 |
| 1.2 感受态细胞制备 | 第35页 |
| 1.3 Total RNA的提取和RT-PCR | 第35-36页 |
| 1.4 Abcb1基因的扩增 | 第36-37页 |
| 1.5 真核表达载体pcDNA3.1-chAbcb1的构建 | 第37页 |
| 1.6 肉鸡Abcb1基因的生物信息学分析 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-44页 |
| 2.1 肉鸡Abcb1基因的克隆 | 第37-38页 |
| 2.2 pMD18T-chAbcb1克隆载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.3 pcDNA3.1-chAbcb1真核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.4 肉鸡P-gp氨基酸序列的生物信息学分析 | 第40-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第三章 MDCK-chAbcb1过表达细胞系的构建 | 第48-66页 |
| 1 材料与方法 | 第49-54页 |
| 1.1 试剂 | 第49-50页 |
| 1.2 试验仪器 | 第50页 |
| 1.3 方法 | 第50-54页 |
| 2 结果 | 第54-61页 |
| 2.1 筛选最适的潮霉素B致死浓度 | 第54-55页 |
| 2.2 MDCK-chAbcb1细胞中Abcb1 mRNA的表达 | 第55-56页 |
| 2.3 细胞的生长曲线 | 第56-57页 |
| 2.4 MDCK和MDCK-chAbcb1细胞中P-gp表达的检测 | 第57-58页 |
| 2.5 MDCK-chAbcb1和Caco-2细胞对Rho123的蓄积能力测定 | 第58-60页 |
| 2.6 MDCK和MDCK-chAbcbl细胞对Rhol23的跨膜转运研究 | 第60页 |
| 2.7 细胞对Rho123转运的米氏常数和转运速率测定 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 第四章 黄连素对MDCK-chAbcb1和Caco-2细胞P-gp功能的影响 | 第66-78页 |
| 1 材料与方法 | 第67-69页 |
| 1.1 试剂和仪器 | 第67页 |
| 1.2 工作液 | 第67-68页 |
| 1.3 单层细胞紧密性与完整性验证 | 第68页 |
| 1.4 维拉帕米和黄连素对Caco-2和MDCk-chAbcb1细胞转运Rho123的影响 | 第68页 |
| 1.5 转运液中Rho123的测定 | 第68-69页 |
| 1.6 数据处理 | 第69页 |
| 2 结果 | 第69-73页 |
| 2.1 单层细胞电阻的测定 | 第69-70页 |
| 2.2 Rho123的标准曲线 | 第70页 |
| 2.3 MDCK-chAbcb1细胞中维拉帕米对Rho123转运的影响 | 第70-71页 |
| 2.4 Caco-2细胞中维拉帕米对Rho-123转运的影响 | 第71-72页 |
| 2.5 MDCK-chAbcb1细胞中黄连素对Rho-123转运的影响 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 第五章 黄连素对肉鸡小肠P-gp转运功能的影响 | 第78-90页 |
| 1 材料与方法 | 第79-81页 |
| 1.1 试剂 | 第79页 |
| 1.2 试验动物与仪器 | 第79页 |
| 1.3 主要工作液配制 | 第79页 |
| 1.4 方法 | 第79-81页 |
| 1.5 数据处理与统计 | 第81页 |
| 2 结果 | 第81-85页 |
| 2.1 Rho123色谱检测方法 | 第81-82页 |
| 2.2 Rho123标准曲线 | 第82-83页 |
| 2.3 Rho123对温度的稳定性试验 | 第83页 |
| 2.4 灌流系统对Rho123吸附性的考察 | 第83-84页 |
| 2.5 黄连素对肉鸡回肠Rho123转运的影响 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 第六章 黄连素对Abcb1及核受体PXR、CAR和CXR mRNA表达的影响 | 第90-116页 |
| 1 材料与方法 | 第91-95页 |
| 1.1 试剂 | 第91页 |
| 1.2 仪器 | 第91-92页 |
| 1.3 细胞株 | 第92页 |
| 1.4 MTT法检测黄连素对细胞活性的影响 | 第92-93页 |
| 1.5 黄连素对Caco-2、MDCK-chAbcb1细胞和肉鸡Abcb1基因表达影响 | 第93-94页 |
| 1.6 黄连素对Caco-2和MDCK-chMDR1细胞P-gp表达的影响 | 第94-95页 |
| 1.7 数据统计 | 第95页 |
| 2 结果 | 第95-110页 |
| 2.1 黄连素对Caco-2和MDCK-chAbcb1细胞的安全浓度和作用时间 | 第95-98页 |
| 2.2 细胞和肉鸡回肠总RNA质量的鉴定 | 第98页 |
| 2.3 扩增曲线和融解曲线绘制 | 第98-100页 |
| 2.4 黄连素对Caco-2和MDCK-chAbcb1细胞Abcb1mRNA表达的影响 | 第100-102页 |
| 2.5 黄连素对Caco-2和MDCK-chAbcb1细胞P-gp表达的影响 | 第102-108页 |
| 2.6 黄连素对Caco-2细胞PXR和CAR mRNA表达的影响 | 第108-109页 |
| 2.7 黄连素对肉鸡回肠组织中Abcb1和CXR mRNA表达的影响 | 第109-110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-116页 |
| 全文总结 | 第116-118页 |
| 创新点 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
