| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-27页 |
| 第一章 诱导多能干细胞的机制研究 | 第13-20页 |
| ·细胞重编程障碍 | 第13-14页 |
| ·分化状态转变为多能性状态 | 第14-17页 |
| ·重编程步骤 | 第14-15页 |
| ·体细胞程序的沉默和细胞分裂速率的变化 | 第15-16页 |
| ·获得上皮样细胞 | 第16页 |
| ·获得多能细胞 | 第16-17页 |
| ·Oct4、Sox2、Klf4 和 c-Myc 共同实现细胞重编程 | 第17-20页 |
| ·重编程因子和诱导多能性网络 | 第17-20页 |
| 第二章 采用不同介导载体进行细胞重编程的研究进展 | 第20-27页 |
| ·整合载体介导系统 | 第20-22页 |
| ·病毒介导系统 | 第20-21页 |
| ·线性 DNA 载体 | 第21-22页 |
| ·piggyBac 转座子 | 第22页 |
| ·非整合方法 | 第22-26页 |
| ·整合缺陷病毒介导 | 第23页 |
| ·瞬时表达游离型载体 | 第23页 |
| ·RNA 介导 | 第23-24页 |
| ·蛋白质介导 | 第24-26页 |
| ·未来发展展望 | 第26-27页 |
| 试验研究 | 第27-63页 |
| 第三章 逆转录病毒载体介导方法诱导体细胞重编程及其鉴定 | 第27-40页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·细胞与病毒载体 | 第27-28页 |
| ·实验试剂 | 第28页 |
| ·仪器与设备 | 第28页 |
| ·溶液的配制 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-32页 |
| ·八眉猪胎儿成纤维细胞的分离培养 | 第29页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞的分离培养 | 第29页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第29页 |
| ·逆转录病毒的包装和侵染 | 第29-30页 |
| ·诱导细胞碱性磷酸酶染色 | 第30页 |
| ·RNA 的提取 | 第30页 |
| ·iPS 细胞免疫荧光检测 | 第30页 |
| ·核型分析 | 第30-31页 |
| ·PCR 反应 | 第31页 |
| ·Real-time PCR 分析 | 第31页 |
| ·iPS 细胞类胚体的形成与贴壁诱导分化 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-38页 |
| ·PEF 细胞重编程的诱导效率及其形态变化 | 第32页 |
| ·获得八眉猪诱导多能干细胞 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR 检测获得的 piPS 细胞内外源因子表达 | 第33-34页 |
| ·细胞免疫荧光检测 | 第34-35页 |
| ·核型分析 | 第35-36页 |
| ·piPS 细胞类胚体的形成与贴壁诱导分化 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第四章 质粒载体介导方法诱导体细胞重编程 | 第40-51页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·细胞株、菌种与载体 | 第40-41页 |
| ·工具酶与其它试剂 | 第41页 |
| ·仪器与设备 | 第41页 |
| ·溶液的配制 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-44页 |
| ·pIRES-Sox2-EGFP 载体的构建 | 第41-42页 |
| ·pOct4/Sox2-EGFP 载体的构建 | 第42页 |
| ·脂质体转染法 | 第42页 |
| ·细胞 RNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·PCR 反应 | 第43页 |
| ·Real-time PCR 反应 | 第43页 |
| ·细胞的免疫荧光检测 | 第43-44页 |
| ·细胞的免疫印记检测 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-49页 |
| ·pOct4/Sox2-EGFP 重组载体的构建与酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·外源 Oct4、Sox2 基因在 HEK 293FT 细胞中的表达 | 第45-47页 |
| ·外源 Oct4 和 Sox2 在 HEK 293FT 细胞中的共定位 | 第47-48页 |
| ·外源 Oct4 和 Sox2 能够激活内源 NANOG 的表达 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第五章 猪 L-Myc 基因在细胞重编程中的应用 | 第51-63页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·菌种、载体及细胞 | 第52页 |
| ·实验试剂 | 第52页 |
| ·仪器与设备 | 第52页 |
| ·溶液的配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·猪 L-Myc cDNA 的引物设计 | 第53页 |
| ·动物组织 RNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·生物信息学分析 | 第54页 |
| ·载体构建 | 第54页 |
| ·脂质体转染法 | 第54页 |
| ·细胞的免疫印记检测 | 第54-55页 |
| ·诱导猪胎儿成纤维细胞重编程 | 第55-56页 |
| ·PCR 反应 | 第56页 |
| ·诱导细胞碱性磷酸酶染色 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-61页 |
| ·猪 L-Myc cDNA 的分子克隆 | 第56-57页 |
| ·L-Myc 基因的生物信息学分析 | 第57-58页 |
| ·构建融合表达载体 pEGFP/L-Myc-C1 及免疫印记检测 | 第58-59页 |
| ·猪 L-Myc 基因在 PEF 细胞重编程中的应用 | 第59-60页 |
| ·诱导细胞进行碱性磷酸酶染色 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 论文创新点 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
