结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）腺苷酸琥珀酸裂解酶功能及其催化活性位点的研究
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 结核分枝杆菌简介 | 第10-11页 |
| 1.1.1 结核分枝杆菌的致病性 | 第10页 |
| 1.1.2 结核分枝杆菌的耐药性 | 第10-11页 |
| 1.1.3 新抗结核药物的研究 | 第11页 |
| 1.2 嘌呤核苷酸简介 | 第11-12页 |
| 1.3 嘌呤核苷酸合成代谢 | 第12-14页 |
| 1.3.1 嘌呤核苷酸从头合成途径 | 第12-14页 |
| 1.3.2 嘌呤核苷酸补救合成途径 | 第14页 |
| 1.4 结核分枝杆菌嘌呤核苷酸合成代谢的研究 | 第14-15页 |
| 1.5 细菌腺苷酸琥珀酸裂解酶研究简介 | 第15-16页 |
| 1.6 本研究的意义和目的 | 第16-17页 |
| 1.7 本研究技术路线 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 引物 | 第19-20页 |
| 2.1.2 质粒 | 第20-22页 |
| 2.1.3 菌株 | 第22-23页 |
| 2.2 试剂和试剂盒 | 第23-24页 |
| 2.2.1 试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.2 试剂盒 | 第24页 |
| 2.3 仪器 | 第24页 |
| 2.4 主要试剂配方 | 第24-27页 |
| 2.4.1 抗生素及诱导剂试剂 | 第24-25页 |
| 2.4.2 主要培养基 | 第25页 |
| 2.4.3 基因组抽提与质粒抽提试剂 | 第25页 |
| 2.4.4 感受态细胞制备与热激转化试剂 | 第25页 |
| 2.4.5 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第25-26页 |
| 2.4.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂 | 第26页 |
| 2.4.7 酶蛋白纯化试剂 | 第26页 |
| 2.4.8 体外酶促反应试剂 | 第26-27页 |
| 2.4.9 其他常用储备试剂 | 第27页 |
| 2.5 实验方法 | 第27-41页 |
| 2.5.1 细菌基因组提取 | 第27-28页 |
| 2.5.2 PCR反应 | 第28-29页 |
| 2.5.3 重叠序列延伸PCR | 第29-30页 |
| 2.5.4 质粒的抽提 | 第30-31页 |
| 2.5.5 DNA片段的分离纯化 | 第31页 |
| 2.5.6 DNA酶切和连接 | 第31-32页 |
| 2.5.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.5.8 感受态细胞制备与热激转化 | 第33页 |
| 2.5.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-35页 |
| 2.5.10 蛋白异源表达与纯化 | 第35-36页 |
| 2.5.11 蛋白浓度测定 | 第36-37页 |
| 2.5.12 遗传互补试验 | 第37-38页 |
| 2.5.13 互补菌株生长曲线的测定 | 第38页 |
| 2.5.14 等温量热滴定法测定酶活力 | 第38-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-58页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 3.2 载体的构建 | 第42-45页 |
| 3.2.1 基因的克隆与点突变改造 | 第42-43页 |
| 3.2.2 互补载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.3 表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.3 遗传互补表型分析 | 第45-48页 |
| 3.3.1 平板互补实验 | 第45-47页 |
| 3.3.2 互补菌株生长曲线的测定 | 第47-48页 |
| 3.4 蛋白的表达和纯化 | 第48-50页 |
| 3.4.1 蛋白表达检测 | 第48-49页 |
| 3.4.2 蛋白质的纯化 | 第49-50页 |
| 3.5 蛋白的酶促反应动力学研究 | 第50-58页 |
| 4 结论与讨论 | 第58-62页 |
| 4.1 讨论 | 第58-59页 |
| 4.2 结论 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
