| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 植物种子油脂生物合成 | 第11-12页 |
| 1.1.1 脂肪酸合成 | 第11页 |
| 1.1.2 三酰甘油的合成及油体形成 | 第11-12页 |
| 1.2 油脂合成代谢中的相关转录因子 | 第12-14页 |
| 1.3 WRI1转录因子 | 第14-15页 |
| 1.3.1 WRI1转录因子功能概述 | 第14页 |
| 1.3.2 WRI1转录因子在主要作物中的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 植物基因组编辑技术的发展历程 | 第15-22页 |
| 1.4.1 锌指核酸酶技术 | 第16页 |
| 1.4.2 类转录激活因子效应物核酸酶技术 | 第16-17页 |
| 1.4.3 CRISPR/Cas9技术 | 第17-22页 |
| 1.5 基因组编辑技术的比较 | 第22-23页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.7 技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 试验材料及仪器 | 第25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-40页 |
| 2.2.1 GmWRI1a基因靶点选择 | 第25-26页 |
| 2.2.2 GmWRI1a基因靶点活性检测 | 第26-29页 |
| 2.2.3 GmWRI1a基因sg RNA寡核苷酸链的设计及载体构建 | 第29-33页 |
| 2.2.4 发根农杆菌介导法转化大豆子叶节 | 第33-34页 |
| 2.2.5 农杆菌介导大豆子叶节转化 | 第34-35页 |
| 2.2.6 转大豆分子生物学检测 | 第35-38页 |
| 2.2.7 转大豆油脂合成相关基因的表达分析 | 第38-39页 |
| 2.2.8 转基因大豆后代功能分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-56页 |
| 3.1 GmWRI1a基因gRNA靶点设计 | 第40页 |
| 3.2 体外酶切检测靶向GmWRI1a基因gRNA活性 | 第40-43页 |
| 3.2.1 gRNA PCR产物的获得 | 第40-41页 |
| 3.2.2 体外转录gRNA | 第41页 |
| 3.2.3 酶切ds DNA的准备 | 第41-42页 |
| 3.2.4 Cas9/g RNA体外酶切反应 | 第42-43页 |
| 3.3 植物CRISPR/Cas9表达载体构建 | 第43-45页 |
| 3.3.1 重组表达载体pVK005-04-GmWRI1asg RNAs的构建 | 第43-44页 |
| 3.3.2 重组质粒pVK005-04-GmWRI1asg RNAs转化农杆菌 | 第44-45页 |
| 3.4 pVK005-04- GmWRI1asg RNAs转化大豆及毛状根的鉴定 | 第45-47页 |
| 3.4.1 转pVK005-04-GmWRI1asg RNAs大豆毛状根的筛选及培养 | 第45-46页 |
| 3.4.2 转pVK005-04-GmWRI1asg RNAs大豆毛状根PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4.3 转pVK005-04-GmWRI1asg RNA大豆毛状根DNA序列分析 | 第47页 |
| 3.5 pVK005-04-GmWRI1asg RNA转化大豆及阳性植株的鉴定 | 第47-56页 |
| 3.5.1 转pVK005-04-GmWRI1asg RNAs大豆的筛选及培养 | 第47-48页 |
| 3.5.2 转pVK005-04-GmWRI1asg RNAs大豆T1代植株抗草铵膦筛选 | 第48-49页 |
| 3.5.3 转pVK005-04-GmWRI1asg RNA大豆T1代植株PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5.4 转pVK005-04-GmWRI1asg RNAs大豆植株DNA序列分析 | 第50页 |
| 3.5.5 转pVK005-04-GmWRI1asg RNA-3大豆植株Real-time PCR检测 | 第50-51页 |
| 3.5.6 转pVK005-04-GmWRI1asg RNA-3大豆糖酵解、脂肪酸合成相关基因表达分析 | 第51-55页 |
| 3.5.7 转pVK005-04-GmWRI1asg RNA-3大豆T1代种子含油量分析 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9技术 | 第56-57页 |
| 4.2 GmWRI1a基因对大豆种子油脂含量的影响 | 第57页 |
| 4.3 GmWRI1a基因对糖酵解、脂肪酸合成途径的调控 | 第57-58页 |
| 4.4 大豆转基因植株抗草铵膦检测的重要性 | 第58页 |
| 4.5 发根农杆菌侵染大豆诱导毛状根 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72页 |
