| 附件 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.1 蜱 | 第13页 |
| 1.2 蜱的先天性免疫 | 第13-15页 |
| 1.3 蜱miRNAs的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 mi RNAs的发现和生物合成 | 第15-16页 |
| 1.3.2 mi RNAs的功能 | 第16-17页 |
| 1.3.3 蜱miRNAs研究概况 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 几种先天性免疫相关miRNAs的鉴定 | 第19-29页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.2.1 试剂及其制备 | 第19-21页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第21页 |
| 2.2.3 生物材料 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.3.1 LPS和PBS显微注射镰形扇头蜱雌蜱 | 第21-22页 |
| 2.3.2 总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.3.3 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.3.4 cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.3.5 前体序列的克隆 | 第23-25页 |
| 2.3.6 荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.4 实验结果 | 第26-28页 |
| 2.4.1 五种先天性免疫相关miRNAs的鉴定 | 第26页 |
| 2.4.2 miRNAs前体序列的扩增及发夹结构的预测 | 第26-28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 miRNAs在镰形扇头蜱的不同发育阶段和不同器官中的表达特征 | 第29-34页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.2.1 试剂及其制备 | 第29页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 3.2.3 生物材料 | 第30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.3.1 镰形扇头蜱的饲养 | 第30页 |
| 3.3.2 镰形扇头蜱的解剖 | 第30页 |
| 3.3.3 总RNA的提取 | 第30页 |
| 3.3.4 引物设计 | 第30页 |
| 3.3.5 cDNA的合成 | 第30-31页 |
| 3.3.6 荧光定量PCR | 第31页 |
| 3.4 结果 | 第31-33页 |
| 3.4.1 五种miRNAs在镰形扇头蜱不同发育时期的表达情况 | 第31页 |
| 3.4.2 五种miRNAs在镰形扇头蜱不同器官中的表达情况 | 第31-33页 |
| 3.5 讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 miR1333p对蜱吸血特性的影响及其在感染巴贝斯虫蜱体内的表达情况 | 第34-42页 |
| 4.1 引言 | 第34-35页 |
| 4.2 实验材料 | 第35页 |
| 4.2.1 试剂及其制备 | 第35页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第35页 |
| 4.2.3 生物材料 | 第35页 |
| 4.3 实验方法 | 第35-37页 |
| 4.3.1 miR1333p激动剂的化学合成 | 第35页 |
| 4.3.2 显微注射 | 第35-36页 |
| 4.3.3 动物学实验 | 第36页 |
| 4.3.4 显微解剖空白对照组的半饱血雌蜱 | 第36页 |
| 4.3.5 昆明小鼠感染田鼠巴贝斯虫模型的构建和饱血镰形扇头蜱的收集 | 第36-37页 |
| 4.3.6 总RNA的提取 | 第37页 |
| 4.3.7 Real-time PCR检测miR1333p在对照组中蜱吸血前后的四个器官的表达量 | 第37页 |
| 4.3.8 Real-time PCR检测miR1333p在实验组半饱血蜱及其脂肪体的表达量 | 第37页 |
| 4.3.9 Real-time PCR检测miR1333p在感染巴贝斯虫的饱血幼蜱中的表达量 | 第37页 |
| 4.4 结果 | 第37-41页 |
| 4.4.1 miR1333p在对照组中蜱吸血前后的四种器官内的表达量 | 第37-38页 |
| 4.4.2 miR1333p在三组半饱血蜱及其脂肪体中的表达情况 | 第38-39页 |
| 4.4.3 miR1333p激动剂对蜱生物学性状指标的影响 | 第39-40页 |
| 4.4.4 蜱吸入感染巴贝斯虫的血液后体内miR1333p的表达情况 | 第40-41页 |
| 4.5 讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 二个miRNAs靶基因的预测及验证 | 第42-55页 |
| 5.1 引言 | 第42-43页 |
| 5.2 实验材料 | 第43-44页 |
| 5.2.1 试剂及其制备 | 第43页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第43-44页 |
| 5.2.3 生物材料 | 第44页 |
| 5.3 实验方法 | 第44-50页 |
| 5.3.1 miRNAs靶基因预测 | 第44页 |
| 5.3.2 靶基因 3’端UTR的基因克隆 | 第44-46页 |
| 5.3.3 双荧光素酶共表达载体构建 | 第46-48页 |
| 5.3.4 293-T细胞的培养 | 第48-49页 |
| 5.3.5 转染实验 | 第49页 |
| 5.3.6 双荧光素酶基因报告实验 | 第49-50页 |
| 5.4 结果 | 第50-54页 |
| 5.4.1 靶基因预测 | 第50页 |
| 5.4.2 miR1333p和miR793p靶基因 3’端非翻译区的克隆 | 第50-51页 |
| 5.4.3 pGL3-control共表达载体的构建和双荧光素酶报告基因检测 | 第51-54页 |
| 5.5 讨论 | 第54-55页 |
| 第六章 全文结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简历 | 第63页 |
