| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 BFB的研究简况 | 第11-15页 |
| 1.1.1 病原菌分类及形态特征 | 第11-12页 |
| 1.1.2 寄主范围与发病规律 | 第12-13页 |
| 1.1.3 危害 | 第13-14页 |
| 1.1.4 症状特点 | 第14页 |
| 1.1.5 防治策略 | 第14-15页 |
| 1.2 西瓜嗜酸菌致病机理的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 Ⅱ型和Ⅲ型分泌系统 | 第16页 |
| 1.2.2 群体感应系统 | 第16-17页 |
| 1.2.3 鞭毛 | 第17页 |
| 1.2.4 菌毛 | 第17-18页 |
| 1.3 本研究的目的意义 | 第18-19页 |
| 2 西瓜嗜酸菌致病性缺失突变体的筛选及Tn5插入位点的鉴定 | 第19-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌株、质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 植物 | 第19页 |
| 2.1.3 培养基与试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 引物 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 菌株的培养 | 第20页 |
| 2.2.2 西瓜果实致病性测定 | 第20-21页 |
| 2.2.3 突变菌株菌落形态与颜色观察 | 第21页 |
| 2.2.4 甜瓜浸种接种 | 第21-22页 |
| 2.2.5 西瓜苗摩擦接种 | 第22页 |
| 2.2.6 突变菌株的PCR检测 | 第22-23页 |
| 2.2.6.1 总DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.6.2 菌株的PCR扩增 | 第23页 |
| 2.2.6.3 电泳检测 | 第23页 |
| 2.2.7 突变体转座子插入位点的鉴定---亚克隆技术 | 第23-27页 |
| 2.2.7.1 突变体总DNA及pBlue质粒DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.7.2 突变体基因组与质粒DNA单酶切 | 第24-25页 |
| 2.2.7.3 基因组DNA和pBLue载体酶切产物的回收与连接 | 第25-26页 |
| 2.2.7.4 转化 | 第26-27页 |
| 2.2.7.4.1 大肠杆菌DH5α热激感受态细胞的准备 | 第26-27页 |
| 2.2.7.4.2 热激转化 | 第27页 |
| 2.2.7.5 转化子的筛选 | 第27页 |
| 2.2.7.6 序列分析 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-35页 |
| 2.3.1 西瓜果实上突变体致病力筛选结果 | 第27-28页 |
| 2.3.2 突变菌株菌落形态和颜色的观察 | 第28-29页 |
| 2.3.3 甜瓜种子接种 | 第29-31页 |
| 2.3.4 西瓜苗摩擦接种 | 第31-32页 |
| 2.3.5 待测突变菌株的PCR检测 | 第32页 |
| 2.3.6 突变体Tn5转座子插入位点的鉴定 | 第32-35页 |
| 2.3.6.1 突变菌株总DNA和质粒DNA Pst Ⅰ酶切效果 | 第32-33页 |
| 2.3.6.2 转化子的获得 | 第33-34页 |
| 2.3.6.3 序列分析 | 第34-35页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第35-36页 |
| 3 西瓜嗜酸菌5个插入基因的功能鉴定 | 第36-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-39页 |
| 3.1.1 菌株、质粒 | 第36-37页 |
| 3.1.2 引物 | 第37-38页 |
| 3.1.3 植物 | 第38页 |
| 3.1.4 培养基 | 第38-39页 |
| 3.1.5 主要试剂 | 第39页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 菌株的培养 | 第39页 |
| 3.2.2 互补菌株的构建 | 第39-41页 |
| 3.2.2.1 野生菌总DNA的提取 | 第39页 |
| 3.2.2.2 PCR扩增目的基因 | 第39页 |
| 3.2.2.3 重组质粒的获得 | 第39-40页 |
| 3.2.2.4 互补质粒的构建 | 第40页 |
| 3.2.2.5 转化-三亲杂交的方法 | 第40-41页 |
| 3.2.2.6 克隆子验证 | 第41页 |
| 3.2.3 过敏性反应测定 | 第41页 |
| 3.2.4 西瓜果实致病性测定 | 第41页 |
| 3.2.5 甜瓜苗的致病性测定 | 第41页 |
| 3.2.6 西瓜苗的致病性测定 | 第41页 |
| 3.2.7 菌株菌落生长状况 | 第41-42页 |
| 3.2.8 生长曲线的测定 | 第42页 |
| 3.2.9 生物膜的测定 | 第42页 |
| 3.2.10 游动性的测定 | 第42页 |
| 3.2.11 群体感应测定 | 第42页 |
| 3.2.12 电镜观察 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-54页 |
| 3.3.1 互补菌株的构建 | 第43-47页 |
| 3.3.1.1 PCR扩增 | 第43页 |
| 3.3.1.2 重组质粒的获得 | 第43-44页 |
| 3.3.1.3 测序分析 | 第44-46页 |
| 3.3.1.4 互补菌株的获得 | 第46-47页 |
| 3.3.2 烟草过敏反应 | 第47页 |
| 3.3.3 西瓜果实致病性测定 | 第47页 |
| 3.3.4 甜瓜浸种 | 第47-49页 |
| 3.3.5 西瓜苗喷雾接种 | 第49-50页 |
| 3.3.6 菌株菌落生长状况 | 第50页 |
| 3.3.7 生长曲线测定 | 第50-52页 |
| 3.3.8 生物膜测定 | 第52-53页 |
| 3.3.9 游动性测定 | 第53页 |
| 3.3.10 群体感应测定 | 第53-54页 |
| 3.3.11 电镜观察 | 第54页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 4 结论与讨论 | 第56-57页 |
| 4.1 主要结论 | 第56页 |
| 4.2 讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
