| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第11-26页 |
| 1.1 角蛋白综述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 角蛋白的结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 角蛋白的产生现状和环境危害 | 第12页 |
| 1.2 角蛋白酶综述 | 第12-19页 |
| 1.2.1 角蛋白酶的微生物多样性 | 第13-15页 |
| 1.2.2 微生物角蛋白酶的产生条件和降解角蛋白的机制 | 第15-17页 |
| 1.2.3 角蛋白酶的生物化学性质 | 第17-18页 |
| 1.2.4 角蛋白酶生产的经济可行性 | 第18-19页 |
| 1.3 角蛋白酶应用前景 | 第19-23页 |
| 1.3.1 洗涤剂工业 | 第19-20页 |
| 1.3.2 皮革工业 | 第20页 |
| 1.3.3 食品饲料工业 | 第20-21页 |
| 1.3.4 有机农业的肥料 | 第21页 |
| 1.3.5 线虫抑制 | 第21页 |
| 1.3.6 X射线胶片的二次利用 | 第21-22页 |
| 1.3.7 朊病毒蛋白的治疗 | 第22页 |
| 1.3.8 生物燃料的生产 | 第22-23页 |
| 1.3.9 其他应用 | 第23页 |
| 1.4 角蛋白酶的分子生物学研究进展 | 第23-25页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 菌株Fea-10的分离和分类鉴定 | 第26-35页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 养鸡场堆积羽毛土壤中角蛋白降解放线菌的分离 | 第27页 |
| 2.2.2 分离到的菌株Fea-10的16S rDNA序列测序 | 第27-29页 |
| 2.2.3 Fea-10形态特征 | 第29页 |
| 2.2.4 Fea-10菌株的生理生化特征检测 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-33页 |
| 2.3.1 角蛋白降解放线菌的分离 | 第30页 |
| 2.3.2 Fea-10菌株的16S rDNA序列扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.3 Fea-10菌株的16S rDNA测序结果分析与N-J树构建 | 第31页 |
| 2.3.4 菌体形态特征和菌落形态特征 | 第31-32页 |
| 2.3.5 菌株Fea-10生理生化特征 | 第32-33页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 菌株Fea-10角蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第35-71页 |
| 3.1 材料 | 第35-38页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和引物 | 第35页 |
| 3.1.2 培养基 | 第35-36页 |
| 3.1.3 试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.4 抗生素与酶 | 第37页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 方法 | 第38-48页 |
| 3.2.1 Fea-10基因组中角蛋白酶基因的发掘 | 第38页 |
| 3.2.2 Fea-10角蛋白酶基因的序列分析 | 第38页 |
| 3.2.3 感受态细胞的制备及热激法转化感受态细胞 | 第38-39页 |
| 3.2.4 角蛋白酶基因gm2886克隆与测序验证 | 第39-40页 |
| 3.2.5 角蛋白酶基因gm2886在大肠杆菌中的表达 | 第40-43页 |
| 3.2.6 SDS-PAGE电泳检测 | 第43-45页 |
| 3.2.7 角蛋白酶基因gm2888克隆与测序验证 | 第45-46页 |
| 3.2.8 2888pro基因中稀有密码子的定点突变 | 第46-47页 |
| 3.2.9 角蛋白酶基因gm2888在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-69页 |
| 3.3.1 角蛋白酶基因gm2886和gm2888的发现与序列分析 | 第48-51页 |
| 3.3.2 gm2886基因克隆载体的构建 | 第51-53页 |
| 3.3.3 gm2886基因表达载体的构建 | 第53-57页 |
| 3.3.4 gm2886基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第57-59页 |
| 3.3.5 重组蛋白2886pro-His的纯化 | 第59-60页 |
| 3.3.6 gm2888基因克隆载体的构建 | 第60-61页 |
| 3.3.7 gm2888基因表达载体的构建 | 第61-64页 |
| 3.3.8 gm2888基因稀有密码子定点突变 | 第64-67页 |
| 3.3.9 gm2888基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第67-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第四章 菌株Fea-10角蛋白酶基因在链霉菌中的表达 | 第71-94页 |
| 4.1 材料 | 第71-73页 |
| 4.1.1 菌株、质粒和引物 | 第71页 |
| 4.1.2 培养基 | 第71页 |
| 4.1.3 试剂 | 第71-72页 |
| 4.1.4 抗生素与酶 | 第72-73页 |
| 4.1.5 主要仪器 | 第73页 |
| 4.2 方法 | 第73-80页 |
| 4.2.1 pSET152-2886native-his载体的构建 | 第73-75页 |
| 4.2.2 接合转移 | 第75页 |
| 4.2.3 pSET152-erm-2886his载体的构建 | 第75-77页 |
| 4.2.4 pSET152-erm-2888his载体的构建 | 第77页 |
| 4.2.5 重组蛋白的纯化及电泳 | 第77-79页 |
| 4.2.6 重组蛋白GM2886-HIS酶活的测定 | 第79页 |
| 4.2.7 重组蛋白GM2886-HIS酶学性质的测定 | 第79-80页 |
| 4.3 结果与分析 | 第80-92页 |
| 4.3.1 gm2886基因带有原始启动子的链霉菌表达载体的构建 | 第80-83页 |
| 4.3.2 gm2886基因带有红霉素启动子的链霉菌表达载体的构建 | 第83-86页 |
| 4.3.3 gm2888基因带有红霉素启动子的链霉菌表达载体的构建 | 第86-88页 |
| 4.3.4 接合子牛奶平板初筛 | 第88-89页 |
| 4.3.5 接合子粗酶液SDS-PAGE检测 | 第89页 |
| 4.3.6 重组蛋白GM2886-HIS的Ni柱纯化 | 第89页 |
| 4.3.7 重组蛋白GM2886-HIS的非变性PAGE电泳检测 | 第89-90页 |
| 4.3.8 重组蛋白GM2886-His6的产量与酶活 | 第90页 |
| 4.3.9 重组蛋白GM2886-HIS的酶学特性 | 第90-92页 |
| 4.4 讨论 | 第92-94页 |
| 第五章 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-104页 |
| 附录 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者简介 | 第107页 |
