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松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1全长克隆和功能分析

致谢第3-4页
摘要第4-6页
abstract第6-7页
前言第11-12页
第一章 文献综述第12-19页
    1 松材线虫病在中国的发生与危害第12页
    2 松材线虫形态特征第12页
    3 松材线虫生活史第12-13页
    4 松材线虫病致病机理研究进展第13-15页
        4.1 酶学说第14页
        4.2 毒素学说第14页
        4.3 空洞学说第14-15页
    5 RNA干扰研究进展第15-17页
        5.1 RNAi作用机制第15-16页
        5.2 RNA干扰技术的应用第16-17页
    6 谷胱甘肽巯基转移酶基因GST的研究进展第17-19页
第二章 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的全长克隆及生物信息学分析第19-39页
    1 试验材料第19-20页
        1.1 供试虫株第19页
        1.2 主要试剂第19页
        1.3 培养基第19-20页
        1.4 主要仪器第20页
    2 试验方法第20-26页
        2.1 松材线虫RNA提取与质量检测第20页
        2.2 单链cDNA合成反应(反转录)第20-21页
        2.3 松材线虫BxGST3和BxGST1核心片段的克隆第21-23页
        2.4 5'/3'RACE技术扩增BxGST3和BxGST1基因的cDNA全长第23-26页
        2.5 松材线虫细胞自噬基因BxGST3和BxGST1生物信息学分析第26页
    3 结果分析第26-37页
        3.1 松材线虫Total RNA的质量检测第26-27页
        3.2 松材线虫BxGST3和BxGST1核心片段的克隆第27-28页
        3.3 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST15'/3'RACE扩增第28-29页
        3.4 松材线虫Bx GST3基因以及其编码蛋白质序列分析第29-33页
        3.5 松材线虫BxGST1基因以及其编码蛋白质序列分析第33-37页
    4 结论与讨论第37-39页
第三章 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1接种前qPCR定量分析及表达的组织特异性分析第39-49页
    1 试验材料第39-40页
        1.1 供试虫株第39页
        1.2 主要试剂第39-40页
        1.3 主要仪器第40页
    2 试验方法第40-44页
        2.1 BxGST3和BxGST1基因在松材线虫接种黑松前后qPCR定量分析第40-42页
        2.2 地高辛标记DNA第42页
        2.3 松材线虫的处理第42-43页
        2.4 松材线虫的杂交处理第43页
        2.5 松材线虫的封阻处理和抗体处理第43页
        2.6 样品显色处理第43-44页
    3 结果与分析第44-48页
        3.1 BxGST3和BxGST1基因在松材线虫接种黑松前后qPCR定量分析第44-46页
        3.2 松材线虫BxGST3和BxGST1基因目的DNA片段标记第46页
        3.3 松材线虫BxGST3和BxGST1基因组织原位杂交结果第46-48页
    4 结论与讨论第48-49页
第四章 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的RNA干扰研究第49-62页
    1 实验材料第49-50页
        1.1 供试虫株第49页
        1.2 主要试剂第49页
        1.3 培养基第49-50页
        1.4 主要仪器第50页
    2 实验方法第50-54页
        2.1 BxGST3、BxGST1和GFP基因的目的片段克隆第50页
        2.2 BxGST3、BxGST1和GFP基因的线性双链DNA扩增和载体构建第50-51页
        2.3 质粒提取第51-52页
        2.4 线性双链DNA再扩增和纯化第52页
        2.5 BxGST3、BxGST1和GFP基因的双链RNA的合成第52-53页
        2.6 松材线虫RNA干扰第53页
        2.7 松材线虫RNA干扰的形态观察第53页
        2.8 Real-time PCR检测RNA干扰效率第53-54页
        2.9 RNA干扰后松材线虫繁殖率测定第54页
        2.10 RNA干扰后松材线虫的致病力测定第54页
    3 结果与分析第54-60页
        3.1 BxGST3、BxGST1和GFP基因线性双链DNA扩增第54-55页
        3.2 合成dsRNA纯度与浓度检测第55-56页
        3.3 松材线虫RNA干扰的形态观察第56页
        3.4 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的RNA干扰效率第56-58页
        3.5 干扰后松材线虫在灰葡萄孢上的取食和繁殖能力第58-59页
        3.6 RNA干扰后松材线虫致病力的变化第59-60页
    4 结论与讨论第60-62页
第五章 全文总结与展望第62-65页
    1 全文总结第62-63页
        1.1 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的全长克隆及生物信息学分析第62页
        1.2 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1表达的组织特异性分析第62-63页
        1.3 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的RNA干扰研究第63页
    2 主要创新点第63页
    3 展望第63-65页
参考文献第65-72页

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