| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 松材线虫病在中国的发生与危害 | 第12页 |
| 2 松材线虫形态特征 | 第12页 |
| 3 松材线虫生活史 | 第12-13页 |
| 4 松材线虫病致病机理研究进展 | 第13-15页 |
| 4.1 酶学说 | 第14页 |
| 4.2 毒素学说 | 第14页 |
| 4.3 空洞学说 | 第14-15页 |
| 5 RNA干扰研究进展 | 第15-17页 |
| 5.1 RNAi作用机制 | 第15-16页 |
| 5.2 RNA干扰技术的应用 | 第16-17页 |
| 6 谷胱甘肽巯基转移酶基因GST的研究进展 | 第17-19页 |
| 第二章 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的全长克隆及生物信息学分析 | 第19-39页 |
| 1 试验材料 | 第19-20页 |
| 1.1 供试虫株 | 第19页 |
| 1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 1.3 培养基 | 第19-20页 |
| 1.4 主要仪器 | 第20页 |
| 2 试验方法 | 第20-26页 |
| 2.1 松材线虫RNA提取与质量检测 | 第20页 |
| 2.2 单链cDNA合成反应（反转录） | 第20-21页 |
| 2.3 松材线虫BxGST3和BxGST1核心片段的克隆 | 第21-23页 |
| 2.4 5'/3'RACE技术扩增BxGST3和BxGST1基因的cDNA全长 | 第23-26页 |
| 2.5 松材线虫细胞自噬基因BxGST3和BxGST1生物信息学分析 | 第26页 |
| 3 结果分析 | 第26-37页 |
| 3.1 松材线虫Total RNA的质量检测 | 第26-27页 |
| 3.2 松材线虫BxGST3和BxGST1核心片段的克隆 | 第27-28页 |
| 3.3 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST15'/3'RACE扩增 | 第28-29页 |
| 3.4 松材线虫Bx GST3基因以及其编码蛋白质序列分析 | 第29-33页 |
| 3.5 松材线虫BxGST1基因以及其编码蛋白质序列分析 | 第33-37页 |
| 4 结论与讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1接种前qPCR定量分析及表达的组织特异性分析 | 第39-49页 |
| 1 试验材料 | 第39-40页 |
| 1.1 供试虫株 | 第39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.3 主要仪器 | 第40页 |
| 2 试验方法 | 第40-44页 |
| 2.1 BxGST3和BxGST1基因在松材线虫接种黑松前后qPCR定量分析 | 第40-42页 |
| 2.2 地高辛标记DNA | 第42页 |
| 2.3 松材线虫的处理 | 第42-43页 |
| 2.4 松材线虫的杂交处理 | 第43页 |
| 2.5 松材线虫的封阻处理和抗体处理 | 第43页 |
| 2.6 样品显色处理 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-48页 |
| 3.1 BxGST3和BxGST1基因在松材线虫接种黑松前后qPCR定量分析 | 第44-46页 |
| 3.2 松材线虫BxGST3和BxGST1基因目的DNA片段标记 | 第46页 |
| 3.3 松材线虫BxGST3和BxGST1基因组织原位杂交结果 | 第46-48页 |
| 4 结论与讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的RNA干扰研究 | 第49-62页 |
| 1 实验材料 | 第49-50页 |
| 1.1 供试虫株 | 第49页 |
| 1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 1.3 培养基 | 第49-50页 |
| 1.4 主要仪器 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-54页 |
| 2.1 BxGST3、BxGST1和GFP基因的目的片段克隆 | 第50页 |
| 2.2 BxGST3、BxGST1和GFP基因的线性双链DNA扩增和载体构建 | 第50-51页 |
| 2.3 质粒提取 | 第51-52页 |
| 2.4 线性双链DNA再扩增和纯化 | 第52页 |
| 2.5 BxGST3、BxGST1和GFP基因的双链RNA的合成 | 第52-53页 |
| 2.6 松材线虫RNA干扰 | 第53页 |
| 2.7 松材线虫RNA干扰的形态观察 | 第53页 |
| 2.8 Real-time PCR检测RNA干扰效率 | 第53-54页 |
| 2.9 RNA干扰后松材线虫繁殖率测定 | 第54页 |
| 2.10 RNA干扰后松材线虫的致病力测定 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-60页 |
| 3.1 BxGST3、BxGST1和GFP基因线性双链DNA扩增 | 第54-55页 |
| 3.2 合成dsRNA纯度与浓度检测 | 第55-56页 |
| 3.3 松材线虫RNA干扰的形态观察 | 第56页 |
| 3.4 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的RNA干扰效率 | 第56-58页 |
| 3.5 干扰后松材线虫在灰葡萄孢上的取食和繁殖能力 | 第58-59页 |
| 3.6 RNA干扰后松材线虫致病力的变化 | 第59-60页 |
| 4 结论与讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第62-65页 |
| 1 全文总结 | 第62-63页 |
| 1.1 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的全长克隆及生物信息学分析 | 第62页 |
| 1.2 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1表达的组织特异性分析 | 第62-63页 |
| 1.3 松材线虫谷胱甘肽巯基转移酶基因BxGST3和BxGST1的RNA干扰研究 | 第63页 |
| 2 主要创新点 | 第63页 |
| 3 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
